авторефераты диссертаций www.x-pdf.ru
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
 

На правах рукописи

Евглевский

Дмитрий Анатольевич

ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ НА ОСНОВЕ

ТОКСИН-ПРОДУЦИРУЮЩИХ МИКРООРГАНИЗМОВ ДЛЯ

АГРОПРОМЫШЛЕННОГО КОМПЛЕКСА

06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология,

микология с микотоксикологией и иммунология

,

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени

доктора ветеринарных наук

Щёлково– 2015

1

премий РФ,

Заслуженный деятель науки РФ

Анатолий Яковлевич Самуйленко

Официальные оппоненты:

Букова Наталия Константиновна – доктор биологических наук, доцент,

профессор, учёный секретарь ФГБУ «Всероссийский государственный центр

качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов»

Смирнова Ирина Робертовна – доктор ветеринарных наук, профессор,

профессор кафедры ветеринарно-санитарной экспертизы и биологической

безопасности ФГБОУ ВПО

«Московский государственный университет

пищевых производств»

Светличкин Вячеслав Владимирович – доктор биологических наук,

профессор,

заведующий

отделом

технического

регулирования,

стандартизации

и

сертификации

ФГБНУ

«Всероссийский

научно-

исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии»

Ведущая организация:

ФГБОУ

ВПО

«Московская

государственная

академия

ветеринарной

медицины и биотехнологии имени К.И.Скрябина».

Защита состоится «

» ___________ 2015 г. в 10 часов на заседании

диссертационного совета Д 006.069.01 по защите диссертаций на соискание

учёной степени доктора наук во «Всероссийском научно-исследовательском и

технологическом институте биологической промышленности» по адресу:

141142, Московская область, Щёлковский район, пос. Биокомбината, д.17,

ВНИИТИБП, e-mail: vnitibp@mail.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке «Всероссийского

Работа выполнена в ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский

и технологический институт биологической промышленности»

Научный консультант:

академик РАН, академик НААН Украины,

доктор ветеринарных наук, профессор,

лауреат Государственной и Правительственной

научно-исследовательского

промышленности».

и технологического института биологической

Автореферат разослан «

»____________ 2015 г.

Автореферат «

»___________-

2015 г. размещён на сайте ФГБНУ

ВНИТИБП

ФАНО

www.vnitibp.сom

и

на

официальном

сайте

ВАК

http://www.vak.ed.gov.ru .

Учёный секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических наук

Фролов Юрий Дмитриевич

2

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность темы. Одним из основных направлений развития

агропромышленного комплекса Российской Федерации является обеспечение

животноводства

эффективными

и

качественными

биопрепаратами.

В

последние годы учёными многих стран обнародованы многочисленные

случаи

инфекционных

процессов,

вызываемых

условно-патогенными

микроорганизмами,

характеризующимися

тяжёлым

течением,

трудно

поддающимся лечению и отличающихся высокой летальностью. В этиологии

этих заболеваний наряду со стафилококками, стрептококками ведущее место

занимает грамотрицательная флора: кишечная палочка, протей, синегнойная

палочка,

клебсиеллы.

Селекцию

штаммов

бактерий

с

высокой

резистентностью и патогенностью обусловило: ухудшение экологической

ситуации

и

иммунной

реактивности

организма;

нерациональное

и

несбалансированное кормление, широкое бесконтрольное использование

антибиотиков и гормональных препаратов для лечения больных животных, а

также усиление вирулентности микроорганизмов в результате многократного

пассирования

через

организм

человека

и

животных.

В

частности,

установлена передача при помощи плазмид способности синтезировать К-

антиген и продуцировать энтеротоксин непатогенным кишечным палочкам от

энтеропатогенных

(Кисленко

В.Н.,

2012).

Постоянно

протекающие

горизонтальные генетические обмены между животными и человеком,

приводят к обогащению биологических видов и формированию новых

животных патогенов, представители которых могут оказаться патогенными

для человека. В развитых странах мира колибактериоз животных находится

под пристальным вниманием ветеринарных и медицинских специалистов,

так как важную роль в инфекционной патологии человека стали играть

эшерихии, вырабатывающие шигаподобный токсин. (Брико Н.И., Ещина

А.С., Рянис Л.А., Рэмси Я., Теннант Б. 2005). Основными направлениями в

борьбе против наиболее распространённых возбудителей инфекций являются

химио-, антибиотикотерапия и специфическая профилактика. Однако,

3

возникновение резистентных форм бактерий, обусловленных присутствием

плазмид резистентности, а также острое течение болезни, заметно снижают

лечебную

эффективность

известных

антибактериальных

препаратов.

Поэтому необходим поиск новых подходов в получении природных и

химических антибиотиков, преодолевающих ферментативную деструкцию

антибиотикоустойчивых микроорганизмов. Несмотря на то, что ветеринарная

практика

имеет

в

своём

распоряжении

большой

набор

лечебно-

профилактических

биопрепаратов

и

антибиотиков,

увеличение

номенклатуры, совершенствование, улучшение их качества и эффективности

по-прежнему остается актуальной задачей. В связи с этим возникает

необходимость продолжения поиска и совершенствования современных

средств специфической профилактики и лечения сельскохозяйственных

животных, в том числе и на основе создания новых биопрепаратов из токсин-

продуцирующих

микроорганизмов,

что

имеет

большое

научное

и

практическое значение.

1.2. Степень разработанности проблемы. Разработке, производству,

контролю

и

применению

лечебно-профилактических

биопрепаратов

посвящено большое количество работ отечественных авторов (Вышелесский

С.Н., Михин Н.А., 1930, Коляков Я.Е.,1960, Квеситадце И.Ф., Шерстобаев

К.Н., Сидоров М.А., 1980, Стрельцов А.Г., 1988, Малахов Ю.А.,1995;

Соколова Н.А.,1996; Тугаринов О.А.,1999; Пирожков М.К., 2007; Самуйленко

А.Я.,2008; Сусский Е.В.,2014). Специфическая активная профилактика

болезней, вызываемых токсин-образующими микроорганизмами, основана на

применении биопрепаратов типа анатоксинов, изготовленных путём их

обезвреживания. Анатоксины-аналоги инактивированных вакцин - препараты

обезвреженного

токсина,

очищенного

от

балластных

веществ,

сконцентрированного и адсорбированного. Основной метод перевода токсина

в анатоксин был впервые применён французским иммунологом Г. Рамоном

(1923), который установил, что прибавление к токсину формалина и

выдерживание при определённой температуре лишает его токсичности, но

4

сохраняет

иммунизирующую

активность.

Существуют

разработки

по

созданию вакцин с анатоксинами E.coli для получения иммуногенных

препаратов с широким спектром действия. К ним относятся поливалентные

инактивированные вакцины, созданные американскими и бельгийскими

учёными (Dobrescu, Descamps, Brown, 1984). Для профилактики и лечения

гнойно-септических болезней в медицине известно применение различных

моно- и поливакцин, содержащих антигены наиболее часто встречающихся

условно-патогенных

микроорганизмов,

например,

стафило-протейно-

синегнойной вакцины (Медуницин Н.В.,1999; Сибагатуллин Н.Г., Михайлова

Н.А.,2000; Нуриддинова Н.Р., Иванова Л.Е., 2002). В США, запатентован

способ

получения

иммуногенных

конъюгатов

термостабильного

энтеротоксина (ТС-энтеротоксина) эшерихий с помощью диальдегида,

дикетона, карбодиимида, изоцианата, эпихалогидрина или дифлуорида

(Wijneadaele

F.V.,1980).

Получен

синтетический

полипептид

термостабильного токсина, содержащего 14 аминокислот N-терминального

участка ТС-энтеротокина эшерихий (Houghten R.A.,1985). Предложен способ

повышения иммуногенности ТС-токсина эшерихий путём его полимеризации

после предварительной частичной очистки (Van Wijnendaele F., Dodrescu L.,

Boon B. 1982). Все полученные синтетические и полусинтетические

конъюгаты ТС-энтеротоксина предлагались для разработки и создания

вакцинных и диагностических препаратов. Gyles C.L. and Maas W.K. (1983)

считали наиболее перспективными вакцины на основе обезвреженных

энтеротоксинов и фимбрий. Испытание токсоидной вакцины, содержащей

очищенный и подвергнутый полимеризации ТС-энтеротоксин эшерихий,

провели AWAD-Nasalmen Н., и Willinger Н. (1987) на поросятах-отъёмышах

при отёчной болезни. Положительные результаты испытания вакцин,

содержащих ТС- и ТЛ-токсины получены рядом авторов и для животных, и

для человека (Honghten R.A.,Engert R.F., Ostresh J.M.,1985, Klipstein F.A.,

Engert R.F., Houghten R.A. 1986).В США и Нидерландах разработали против

эшерихиозов животных вакцины, содержащие адгезивные антигены К88,

К99, 987P и термолабильный анатоксин (ТЛ-анатоксин). Согласно данным

5

авторов (Chirila F.,Vana V., 1994), препарат обладал двойным эффектом:

предотвращал прикрепление эшерихий, продуцирующих адгезины К88, К99,

987P к эпителиальным клеткам кишечника и нейтрализовал действие

термолабильного токсина. Кроме того, установлено, что ассоциация антигена

К88 и ТЛ-анатоксина в вакцине обеспечивала больший протективный эффект.

Анализ

литературных

данных

показал,

что

для

получения

высокоэффективных

препаратов

специфической

профилактики

колибактериоза в вакцину необходимо вводить все антигены, ответственные

за вирулентность и иммуногенность эшерихий. Однако, в отличие от научно-

экспериментальных разработок, зарубежные коммерческие вакцины против

эшерихиоза животных, зарегистрированные в РФ, имеют ограниченный

набор протективных антигенов, в чём легко убедиться, анализируя их

антигенный состав. Так, например, вакцина «Порцилис. Coli» (Нидерланды)

изготовлена из анатоксина LT Escherichia coli: F4ab(K88ab), F4ac(K88ac),

Fs(K99),F6 (987P), защищающего животных от энтеротоксикоза. Вакцина

«Порцилис. Coli. Clos» содержит в своём составе фимбриальные адгезины и

термолабильный токсин E.coli, а также антиген типа С клостридий.

В этой связи отечественные учёные конструировали колибактериозные

вакцины

на

основе

природных

штаммов

эшерихий,

содержащих

оптимальные количества адгезивных антигенов и анатоксинов. (Малахов Ю.,

1995; Тугаринов О.А., 1999; Пирожков М.К., 2007).

Исследователями

также

было

показано,

что

иммунитет

при

стафилококковых инфекциях преимущественно антитоксический, слабой

напряжённости и непродолжительный, что обусловливает частые рецидивы.

Тем не менее, высокие титры антитоксинов в крови животных повышали их

устойчивость

к

повторным

заражениям.

Антитоксины

не

только

нейтрализовали экзотоксины стафилококков, но и способствовали быстрой

мобилизации фагоцитоза (Колычев Н.М., Госманов Р.Г., 2014).

В

настоящее

время

проблему

антибиотикорезистентности

микроорганизмов фармакологические предприятия пытаются решать путём

6

высокодозных антибиотиков, комбинацией нескольких антибиотиков разных

групп, разработкой и применением новых поколений, а также введением

фтора, пиперазинового радикала, клавулоновой кислоты, которые на

короткий период обеспечивают бактерицидный эффект на фоне высокой

токсичности.

Поэтому вопросы токсичности антибиотиков, как и их эффективности,

остаются актуальными, а появление и распространение приобретённой

резистентности у бактерий создают проблему антибактериальной терапии

больных животных.

1.3. Цель и задачи исследований. Целью исследований явилась

разработка и получение высокоэффективных лечебно-профилактических

биопрепаратов путём создания препаратов нового поколения, изготовленных

на основе анатоксинов возбудителя, обладающих высокой антигенной и

иммуногенной активностью и широким спектром защитного действия.

Для достижения поставленной цели решились следующие задачи:

- изучить возможность конструирования универсального состава

питательных синтетических сред с учётом метаболизма микроорганизмов;

- использовать новые средства и способы детоксикации, полимеризации

бактериальных токсинов и антибиотиков;

- предложить для практики способ оценки полноты инактивации

токсинов бактерий;

-

изготовить

опытные

серии

анатоксин-вакцин,

изучить

их

иммуногенность и безвредность для животных;

-

разработать

технологии

производства

и

изучить

лечебно-

профилактическую

эффективность

стафилококковой,

стафило-

стрептококковой, коли-стафило-протейно-синегнойной, колибактериозной,

сальмонеллёзной и колисальмонеллёзной анатоксин - вакцин;

- апробировать способы получения модифицированных антибиотиков и

изучить их эффективность и токсичность;

- разработать нормативную документацию.

7

1.4.

Научная

новизна.

Для

получения

высокоэффективных

колибактериозных,

коли-сальмонеллёзных,

стафилококковых

анатоксин-

вакцин впервые предложена универсальная синтетическая питательная среда,

обеспечивающая стабильно высокое накопление микроорганизмов (Патент №

2439142

«Синтетическая

питательная

среда

для

выращивания

микроорганизмов»).

Применение принципиально новых средств и способов детоксикации,

полимеризации и инактивации бактериальных токсинов позволило получать

лечебно-профилактические препараты с повышенными иммуногенными и

протективными свойствами (Патент № 2377013 «Способ получения стафило-

кокковой анатоксин-вакцины», Патент № 2392003 «Способ получения саль-

монеллёзной анатоксин-вакцины», Патент № 2371197 «Способ получения

коли-сальмонеллезной анатоксин-вакцины», Патент №2372937 «Способ по-

лучения коли-бактериозной анатоксин-вакцины», Патент № 2377014 «Способ

получения стафилококковой анатоксин-вакцины», Патент № 2377016 «Спо-

соб получения стафило-стрептококковой анатоксин-вакцины»).

Против инфекций, обусловленных условно патогенными микроорга-

низмами, сконструирована новая ассоциированная коли-стафило-протейно-

синегнойная вакцина, представляющая собой комплекс подвергнутых деток-

сикации, сорбции на гидроокиси алюминия и очищенных, концентрирован-

ных анатоксинов эшерихии, стафилококка, синегнойной палочки и протея

(Патент № 2386448 «Способ получения ассоциированной анатоксин-вакцины

для профилактики и лечения гнойно-септических болезней»).

Для

контроля

процесса

полной

инактивации,

стандартизации

стафилококковых анатоксинов, изучения аллергических реакций предложена

биологическая модель аллергии (Патент № 2405146 «Способ создания

биологической модели аллергии к стафилококковому аллергену»).

Предложен способ получения модифицированных антибиотиков, эффек-

тивных, в том числе и в борьбе со штаммами антибиотикоустойчивых мик-

роорганизмов. Впервые повышение бактерицидной и лечебной эффективно-

8

сти модифицированных антибиотиков достигнуто путём детоксикации и по-

лимеризации антибиотика альдегидом муравьиной кислоты – раствором

формальдегида отдельно или раствором глутарового альдегида в сочетании с

четвертичными аммониевыми соединениями, что обеспечивает устойчивость

к деструктивному действию бактериальных ферментов при снижении токси-

ческих свойств препаратов (Патент №2400218 «Способ повышения эффек-

тивности антибиотиков», Патент №2405834 «Способ повышения эффектив-

ности стрептомицина в отношении устойчивых к нему M. tuberculosis», Па-

тент № 2425668 «Способ повышения эффективности антибиотиков», Патент

№ 2426790 «Способ повышения эффективности стрептомицина в отношении

стрептомициноустойчивых микобактерий туберкулеза», Патент № 2426789

«Способ повышения эффективности канамицина в отношении канамицино-

устойчивых микобактерий туберкулеза»).

Сконструированы многокомпонентные нетоксичные лекарственные

средства, с ускоренным выведением из организма животного для лечения

трещин сосков вымени у коров, маститов, эндометритов, дерматитов (Патент

№ 2527330 «Способ повышения биоцидного и лечебного действия крема –

суспензии с метронидазолом»).

Получен нативный аллерген для аллергической диагностики стафило-

коккоза у животных с помощью растворимых аллергеноактивных соедине-

ний без использования трихлоруксусной кислоты (Патент № 2378369 «Спо-

соб получения стафилококкового аллергена»).

Предложен новый безопасный и эффективный способ выделения чистой

культуры микобактерий с помощью лимонной и янтарной кислот, перекиси

водорода (Патент № 2455361 «Способ выделения чистой культуры микобак-

терий туберкулёза»).

1.5. Практическая значимость работы.

Экспериментально

обосновано

применение

разработанных

технологических решений при производстве высокоэффективных анатоксин-

вакцин для профилактики и лечения заболеваний бактериальной этиологии

сельскохозяйственных животных.

9

и способ их детоксикации и

протея с целью получения энтеротоксинов

полимеризации для получения биопрепаратов.

Проведённые

испытания

в

животноводческих

хозяйствах

стафилококковой, коли-сальмонеллёзной, стафило-стрептококковой, коли-

стафило-протейно-синегнойной анатоксин-вакцин, подтвердило их лечебно-

профилактическую эффективность.

При производстве анатоксин-вакцин предложены способы и средства

детоксикации,

полимеризации

бактериальных

токсинов,

позволяющие

обеспечить устойчивость вакцинированных животных к

воздействию

бактерий, снизить токсичность, и повысить лечебно-профилактическую

эффективность биопрепаратов.

Разработаны и утверждены в установленном порядке комплекты

нормативных документов на производство, контроль и применение лечебно-

профилактических

препаратов,

изготовленных

на

основе

токсин-

продуцирующих микроорганизмов.

1.6. Положения диссертации, выносимые на защиту:

-

отбор

штаммов

микроорганизмов,

обладающих

высокой

способностью токсинообразования;

- результаты разработки и апробации универсальной жидкой и плотной

синтетической

питательной

среды

для

выращивания

бактерий

при

производстве вакцин;

- материалы создания и апробации эффективной биологической

модели для определения полноты детоксикации стафилококкового токсина;

- результаты применения стафилококковой анатоксин-вакцины и

апробации лечебно-профилактических свойств при стафилококкозе птиц,

маститах, заживлении ожоговых и гнойно-некротических ран, дерматитах у

плотоядных;

10

Разработан

и

апробирован

состав

универсальной

синтетической

питательной

среды

для

оптимального

накопления

стафилококков,

сальмонелл, кишечной, синегнойной палочки (Pseudomonas auroginosa),

- материалы по получению и применению стафило-стрептококковой,

коли-стафило-протейно-синегнойной

анатоксин-вакцин

и

изучению

их

протективных и иммуногенных свойств;

- способ получения колибактериозной, сальмонеллёзной и комплексной

коли-сальмонеллёзной анатоксин-вакцины и результаты апробации при

профилактике и лечении желудочно-кишечных болезней телят, поросят

колисальмонеллёзной этиологии.

1.7. Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены

и

обсуждены

на

научных

конференциях:

международной

научно-

практической конференции, г. Харьков (2003,2013), международных научных

конференциях

профессорско-преподавательского

состава,

научных

сотрудников и аспирантов Санкт-Петербургской государственной академии

ветеринарной

медицины,

г.

Санкт-Петербург

(2003,

2009,

2010);

Всероссийской

научно-практической

конференции,

г.

Курск

(2009);

Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 120-летию

ветслужбы Курской области, г. Курск (2003); международной научно-

практической

конференции

«Актуальные

проблемы

повышения

эффективности

агропромышленного

комплекса»,

г.

Курск

(2008),

международной научно-практической конференции, посвященной 125-летию

ветеринарии

Курской

области

«Актуальные

проблемы

ветеринарной

медицины»,

г.

Курск

(2008),

Международной

научно-практической

конференции

«Теоретические

и

прикладные

проблемы

ветеринарной

медицины»,

г.

Курск

(2009),

международной

научно-практической

конференции - «Научное обеспечение агропромышленного производства»,

Курск, 2012, на агропромышленной выставке «Золотая осень» (2009-2014 гг.).

1.8. Публикация научных исследований. По материалам диссертации

опубликовано 117 научных статей, в том числе 39 - в изданиях,

рекомендованных ВАК РФ, 6 монографий, получено 28 патентов и 6

дипломов Всероссийской агропромышленной выставки - «Золотая осень» -

золотая, бронзовая и серебряные медали – 2009- 2014 гг.

11

1.9. Структура и объём диссертации. Диссертация изложена на 352

страницах компьютерного текста и включает введение, обзор литературы,

материалы и методы исследований, результаты собственных исследований и

их

обсуждение,

выводы

и

практические

предложения.

Работа

иллюстрирована 16 рисунками и 30 таблицами. Список литературы включает

359 источников, в том числе 136 - иностранных авторов. В приложении

представлены

копии

документов,

подтверждающих

достоверность

результатов работы, её научную и практическую значимость: патенты, акты

испытаний,

проекты

Технологических

регламентов,

проекты

СТО,

инструкции по применению анатоксин - вакцин и модифицированных

антибиотиков, дипломы Всероссийской агропромышленной выставки -

«Золотая осень»-2009- 2014 гг.

1.10. Личный вклад соискателя. Диссертационная работа выполнена

автором самостоятельно и является совокупностью его многолетних научных

исследований. Автором лично сформулирована проблема, постановка цели,

задач исследований и их реализация. Лично автором также подобраны

штаммы,

оптимизирована

технология

производства

и

показана

эффективность

применения

анатоксин-вакцин

и

модифицированных

антибиотиков. Материалы диссертации также проанализированы и обобщены

лично автором. Вклад в работу других авторов отражён в публикациях по

теме диссертации.

1.11.

Достоверность

результатов

исследований

подтверждается

соответствием

теоретических

данных

с

полученными

результатами

экспериментов и опытно-производственных испытаний. Экспериментальные

данные, выводы и рекомендации основаны на общепринятых теоретических

закономерностях, не противоречат и с достаточной степенью точности

согласуются с общеизвестными данными, апробированы и подтверждены

эффективным применением в животноводческих хозяйствах.

1.12.

Благодарности.

Автор

выражает

благодарность

научному

консультанту

директору

ВНИТИБП,

доктору

ветеринарных

наук,

профессору, академику РАН А.Я. Самуйленко. В выполнении некоторых

12

разделов диссертации принимали участие и оказывали практическую и

консультативную помощь доктор медицинских наук В.М. Коломиец и другие

коллеги, за что приношу им сердечную благодарность.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена в отделе противобактерийных препаратов ФГБНУ

«Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт

биологической промышленности» по программам РК 01.201169495 и РК

01.200201567

(ИК

02.2.00603501).

Опытно

-

промышленные

серии

биопрепаратов испытывали в ФГБОУ ВПО «Курская государственная

сельскохозяйственная академия имени И.И. Иванова», в Курском научно-

исследовательском

институте

агропромышленного

производства

Россельхозакадемии, на кафедре туберкулёза Курского государственного

медицинского университета, в Курской областной ветеринарной лаборатории,

в

«Жуковской

ветеринарной

лаборатории»

Калужской

области

и

в

животноводческих хозяйствах Белгородской, Орловской, Курской областей.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Штаммы. В исследованиях использованы: 80 штаммов эшерихий, в том

числе 21 производственный, 42 музейных и 17 изолятов; 40 штаммов

стафилококков,

20

штаммов

сальмонелл,

3

штамма

стрептококков,

селекционированных по способности продуцировать факторы патогенности

(токсины), 30 штаммов и изолятов синегнойной палочки, 20 штаммов и

изолятов протея. Музейные культуры бактерий получены из Курской

областной ветеринарной лаборатории и с кафедры микробиологии и

вирусологии Курского государственного медицинского университета.

Питательные

среды,

наборы

и

реактивы.

Для

проведения

бактериологического исследования по стандартным методикам использовали

мясопептонный агар (МПА), мясопептонный кровяной агар (МПКА) и агар

Эндо. В отдельных опытах в качестве селективной среды использовали агар

Плоскирева и висмут-сульфат агар, а также RVS-бульон, тетратионатный

13

бульон

Мюллера-Кауфмана,

ХLD,

ХLТ

агар,

Rambach

Аgаг.

Для

выращивания сальмонелл в больших количествах применяли жидкую среду

- мясопептонный бульон с 0,5% глюкозы. Биохимические свойства культур

изучали с использованием пластин биохимических энтеробактерий (ПБДЭ),

СИБ, АРI ID 32 Е, автоматического баканализатора VIТЕК 2 Сотрас1

производства «BioMerieuх», Франция..

Методы.

Для

изучения

антигенной

структуры,

определения

серогрупповой

и

вариантной

принадлежности

выделенных

культур

сальмонелл использовали стандартные наборы биофабричного производства

агглютинирующих комплексных или

поливалентных О-сывороток

и

монорецепторных О и Н- сывороток. Для определения серогрупповой

принадлежности эшерихий применяли 0-коли агглютинирующие сыворотки

Армавирской биофабрики, для выявления и количественного определения

энтеротоксинов

анти-ТЛ-

и

анти-ТС-сыворотки

производства

Государственного научного Центра (ГНЦ) прикладной микробиологии,

адгезивных антигенов - набор антисывороток к адгезивным антигенам

эшерихий К88, К99, 987Р, F41, А20 (коли-адгезин тест) производства НПФ

"Диавак". Качественную характеристику токсигенности культур эшерихий

проводили по эдематозному тесту Вартаняна Ю.П. (1978). Количественное

определение адгезивных антигенов проводили методом двойной радиальной

диффузии в агарозе по Ухтерлони (РДП). Количественное определение

токсинообразования проводили у штаммов эшерихий в РДП с анти-ТЛ- и

анти-ТС-сыворотками и в тесте изолированной петли кишечника поросенка

по индексу дилятации, подробно описанному в работе Пирожкова М.К., 2007.

Также продукцию термостабильного токсина (ТС-токсина) выявляли на

мышах-сосунах при пероральном введении, на мышах массой 14-16 г. при

интраплантарном введении и на кроликах при внутрибрюшинном введении

по индексу увеличения веса кишечника, отёку лап мышей и некрозу кроликов

соответственно

(Тугаринов

О.А.,1999).

Оптимальная

концентрация

адъюванта определялась по ИД50 при иммунизации лабораторных животных

14

вакцинами с различным содержанием геля гидроокиси алюминия. Острую и

хроническую токсичность вариантов ассоциированных вакцин изучали на

двух

видах

животных

(мыши

и

крысы)

путём

морфологического

исследования внутренних органов и кожи на месте инъекции.

Изучение

бактериостатического

и

бактерицидного

действия

антибиотиков проводили в отношении свежевыделенных стафилококков,

сальмонелл, кишечной палочки, протея, синегнойной палочки от павших

телят,

поросят,

птицы;

канамицино-

и

стрептомициноустойчивых

микобактерий туберкулёза человеческого и бычьего видов, выделенных от

больных туберкулезом животных и человека на кафедре туберкулеза Курского

государственного медицинского университета и межрайонных ветеринарных

лабораторий.

Определение чувствительности штаммов бактерий к антибиотикам

проводили методом диффузии в агар (среда АГВ) при помощи стандартных

дисков с антибиотиками. Культивирование стафилококков, сальмонелл,

эшерихий, протея, синегнойной палочки, стрептококков осуществляли

стационарным методом в стеклянных бутылях объёмом 0,5, 5,0 и 20 дм3,

модернизированных реакторах объёмом 600 и 1000 дм3 и биореакторе

«Торнадо» объёмом 200 дм3. Концентрацию микроорганизмов оценивали по

стандарту мутности ГИСК им. Тарасевича, морфологию – микроскопией

мазков, окрашенных по Граму. Изготовление и контроль посевных

материалов

микроорганизмов

осуществлялись

в

соответствии

с

требованиями ГОСТ Р 52249-2009. Ростовой потенциал и физиологическую

активность бактерий оценивали графическим методом по продолжительности

фаз приспособления (tлаг) и логарифмического роста (tлог), максимальной

удельной скорости роста (max) бактерий и времени одной генерации (gмин) в

процессе

периодического

культивирования

и

уровню

накопления

микроорганизмов

(Исаева

З.А.,

1980).

Лечебную

эффективность

стафилококковой анатоксин-вакцины проверяли при лечении коров, больных

маститами, ожоговых, рваных ран и дерматитов у собак, а также в качестве

15

иммуномодулятора. Безвредность приготовленных вакцин проверяли на 100

белых мышах, 80 морских свинках, 300 поросятах и 102 телятах. Контролем

эффективности иммунного ответа на активную иммунизацию служил рост

титра специфических антител в сыворотке крови, определяемый реакцией

пассивной гемагглютинации (РПГА) с использованием специфических

эритроцитарных

диагностикумов:

стафилококкового,

протейного

и

синегнойного (Кунягина О.В.,1996).

Результаты исследований подвергали статистической обработке с

вычислением средней арифметической (М), ошибки средней арифметической

(m) и достоверности разницы (р) между средними величинами по методу

Стьюдента-Фишера.

Отличие

сравниваемых

показателей

считали

достоверными, если уровень вероятности не превышал р0,05 (Ашмарин

И.П., Воробьев А.А., 1962; Лакин Г.Ф.,1990; Венедягин Г.В., 1973).

Расчёты и построение технологических графиков осуществляли с

помощью

пакета

MICROSOFT

OFFICE

EXCEL

2010,

построение

технологических и аппаратурных схем – с помощью программы Microsoft

Office VISIO 2010.

Структурно-методологическая схема диссертационной работы пред-

ставлена на рисунке 1.

16

лечебно-профилактических препаратов

Разработка технологической схемы получения

лечебно-профилактических препаратов

Разработка и усовершенствование

технологических этапов получения лечебно-

профилактических препаратов

научные

исследования

Обеспечение

качества

выпускаемых

препаратов

Проектная

документация и

проект регламента

производства

Разработка и

совершенствование

анатоксин-вакцин

Разработка модифицированных антибиотиков

Сальмонеллы

Стафилококки

Эшерихии

Стрептококки

Протей

Синегнойная палочка

Этапы разработки

Исследования

Форма завершения

Поисковые

Анализ традиционных технологий получения

Изготовление и контроль посевного

материала

Подбор оптимального состава

питательных сред

Оптимизация режимов

культивирования

Инактивация, детоксикация, полимеризация и эффективный способ

оценки полноты инактивации токсинов бактерий

Концентрирование

Технологический

регламент, проект

СТО, временная

инструкция

Акты испытаний

ТУ, Методические

положения,

Инструкция по

применению

Изготовление опытно-

промышленных серий препарата

Испытание препаратов в

хозяйствах

Доклинические испытания

Клинические испытания

Разработка и утверждение НД

Рис. 1. Структурно-методологическая схема диссертационной работы

17

проект

Жидкая

фракция

Твердая

фракция

Экзотоксин

Ультрафильтрационная

установка

Модифицированные

антибиотики

Анатоксин-вакцины

Классическая

вакцина

Разгон

посевного

материала

Центрифуга

Эндотоксин

Реактор

Дезинтегратор

Рис.2. Технология получения лечебно-профилактических биопрепаратов против

бактерийных инфекций

3.1.1. Разработка и характеристика универсальной синтетической

питательной среды для выращивания микроорганизмов

Известно, что мясопептонный бульон (МПБ) с глицерином является

пригодным для выращивания многих микроорганизмов, и имеет следующие

недостатки:

нестабильность

состава,

не

равномерность

роста

микроорганизмов, наличие балластных веществ и возможные аллергические

проявления

у

вакцинированных

животных.

Однако

для

получения

стрептококкового,

стафилококкового

анатоксина,

колибактериозных,

сальмонеллёзных

анатоксин-вакцин,

синегнойной

вакцины

для

ветеринарных и медицинских целей по-прежнему используются мясо-

гидролизатные или казеино-гидролизатные бульоны.

18

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Получение и изучение лечебно-профилактической

эффективности анатоксин-анимикробных вакцин

Обобщённая

технология

получения

лечебно-профилактических

противобактерийных препаратов представлена на рисунке 2.

Антиген

для РА,

ИФА

Поэтому нами разработана универсальная синтетическая питательная

среда,

лишённая

вышеуказанных

недостатков.

Введение

в

состав

синтетической питательной среды лимонной и янтарной кислот (ди-,

трикарбоновые кислоты цикла Кребса) способствовало повышению обмена

веществ

у

микроорганизмов,

улучшению

растворимости

химических

ингредиентов и образованию цитрата аммония при нейтрализации лимонной

кислоты 5-10%-ным раствором аммиака. Образование цитрата аммония как

азотистого соединения, необходимого для построения белковых молекул

микроорганизмов, способствовало улучшению обмена веществ и росту

микробной биомассы. Введение в состав питательной среды глицина в

сочетании с аспарагином (амид аспарагиновой кислоты) улучшало биосинтез

белковых

структур

микроорганизмов,

а

хлористый

натрий

и

фосфорнокислый натрий двузамещённый повышали буферную ёмкость и

препятствовали закислению рН среды при росте бактерий. В результате было

показано, что выращенные на данной среде бактериальные клетки имели

типичную

морфологию,

культуральные

и

биохимические

показатели,

обладали выраженными ростовыми свойствами и характеризовались высокой

жизнеспособностью.

Результаты

роста

и

накопления

микроорганизмов

на

плотной

синтетической среде представлены в таблице 1.

Таблица 1.

Накопление бактериальной массы при выращивании микроорганизмов на

синтетической среде

№п/п

Наименование

Сроки

микроорганизмов

выращивания

стационарным

способом,

сутки

Накопление бактерий

стационарным способом,

млрд/см3

1

Стафилококки

7

7,0±0,66

(Золотистый)

2

Сальмонеллы

3

Кишечная палочка

4

протей

5

Синегнойная палочка

12

12,0±0,46

2

70,0±1,08

2

70,6±1,04

2

78,4±1,03

2

64,6±1,14

19

Наименование показателей

Максимальная

Минимальное

Продолжитель-

Продолжитель-

ность логариф-

ность фазы

мической фазы

приспособления

роста (tлог ), час

(tлаг ), час

3,4

0,18

3,3

0,22

3,5

0,19

Наименование

бактерий

s.aureus.

S. typhimurium

E. coli

удельная

скорость роста

(μmaх), 1/час

время генерации

(gmin), час

Для выращивания стафилококков в составе среды увеличивали

содержание хлористого натрия до 5-6 г/л и рН до 7,5-7,6 в соответствии с

физиологическими требованиями этого вида микроорганизмов.

Использование

глубинного

метода

культивирования

позволило

сократить длительность накопления бактериальной массы сальмонелл и

эшерихий, повысить её жизнеспособность, снизить затраты на производство

стандартных антигенов. В дальнейшем была разработана, смонтирована и

запущена в эксплуатацию технологическая линия, оснащенная биореактором,

ёмкостями для изготовления растворов и антигенов, ультрафильтрационными

установками для концентрирования и трубопроводами из нержавеющей

стали для подачи и хранения растворов и антигенов.

Таблица 2

Характеристики роста протея, сальмонелл и эшерихий при периодическом

культивировании микроорганизмов

0,33

1,87

2,21

0,31

2,04

0,33

Результаты

периодического

культивирования

микроорганизмов,

предоставленные в таблице 2, свидетельствуют о том, что предложенная

технология периодического культивирования микроорганизмов достаточно

эффективна: минимальны фазы приспособления (tлаг) и время одной

генерации (gmin), эффективные удельная скорость роста (μmaх) и длительность

фазы экспоненциального роста (tлаг) бактерий.

Таким образом, синтетическая питательная среда пригодна для

выращивания многих патогенных микроорганизмов.

3.1.2. Получение анатоксин-вакцины против эшерихиоза

сельскохозяйственных животных

Совершенствование существующих и разработка новых средств специ-

фической профилактики и терапии колибактериоза в первую очередь вклю-

20

чала селекцию производственных штаммов эшерихий, входящих в состав

препарата. Известно, что селекционировать штаммы можно по различным

признакам: форме и структуре колоний, вирулентности, антигенной и имму-

ногенной активности и т.д. В данном случае была проведена направленная

селекция штаммов эшерихий по степени продукции ими энтеротоксинов -

основных иммунологически важных факторов патогенности. Качественную

характеристику токсигенности отобранных штаммов эшерихий осуществля-

ли на белых мышах по эдематозному тесту, в котором наблюдалось синерги-

ческое действие как ТЛ, так и ТС токсинов. С целью исключения действия

эндотоксина, культуры штаммов предварительно центрифугировали для уда-

ления бактериальных клеток и в опыте использовали только культуральную

жидкость. Культуральная жидкость, лишённая бактериального компонента,

служила материалом, содержащим экзотоксин Е.coli. Исследования уровня

продукции эшерихиями термолабильного токсина проводили в тесте изоли-

рованной петли кишечника у всех отобранных штаммов эшерихий независи-

мо от результатов определения их токсигенности, полученных в эдематозном

тесте. При исследовании культуральной жидкости выбирали в качестве про-

изводственных те штаммы, у которых титр продукции термолабильного и

термостабильного токсинов с моноспецифическими сыворотками в РДП был

не ниже 1:4 и 1:16 соответственно. Для определения иммуногенной активно-

сти вакцин из штаммов, отличающихся интенсивностью токсинообразования,

были приготовлены разные вакцины: две содержали разное количество ана-

экзотоксина, обработанного 0,2% -ным раствором формалина и 0,5±0,1%-

ным этонием, и одна вакцина, не содержащая ТС и ТЛ токсины. Полная и не-

обратимая детоксикации и полимеризации энтеротоксинов путём использо-

вания на первой стадии детоксикации 0,2% -ного раствора формалина вместо

0,8±0,2%-ного и во второй стадии 0,5±0,1% -ного этония, обладающего не

только детоксицирующими, но консервирующими, бактерицидными и фун-

гицидными свойствами, позволила предложить рациональную технологию

изготовления эффективной и безвредной колибактериозной анатоксин-

вакцины без ртутьсодержащего консерванта - мертиолята. Полимеризация

21

Состав

Доза,

вакцины

см3

Штамм

с 0,5

экзотоксином 0,1

0,025

0,05

Штамм

с 0,5

экзотоксином 0,1

0,025

0,05

Штамм

без 0,5

экзотоксина

0,1

0,025

0,05

Коли-

чество

мышей

в

опыте,

штуки

5

5

5

Титр

токсинов

(РДП)

ТЛ

ТС

1:16

1:4

1:4

1:2

нет

нет

Cредний

Результат

индекс дилята-

заражения

ции

мышей

вирулентным

штаммом

живы

пали

1,76±0,16

4

1

4

1

3

2

1

4

0,039

0, 169

0,112

анаэкзотоксина позволяла получить иммуногенный термостабильный энте-

ротоксин - гаптен по своей природе, так как он является одним из ведущих

факторов в патогенезе колидиарей телят и ягнят. Моновакцина, содержащая

анаэкзотоксин, обладала большей иммуногенной активностью, чем моновак-

цина, не содержащая анаэкзотоксин. В таблице 3 представлены результаты

иммунизации мышей экспериментальными вакцинами, которые показали,

что 50 % иммунизирующая доза для мышей у экспериментальных вакцин со-

ставила соответственно 0,039, 0, 169 и 0,112 см3.

Таблица 3

Иммуногенная активность вакцин в зависимости от содержания

анаэкзотоксина

0,82±0,07

0,32±0,05

-

4

1

2

3

2

3

1

4

2

3

2

3

1

4

0

5

0

10

КОНТРОЛЬ

-

10

-

-

Эффективность вакцины против эшерихиоза животных была проверена

в остром опыте на ягнятах, телятах и мышах. Результаты испытания

эффективности вакцины в остром опыте представлены в таблице 4, которые

показали высокую выживаемость животных, хотя незначительные случаи

заболевания всё же отмечались.

22

ИД

см3

5О,

Вид животного Коли-

Доза

чество

вакцины

голов

подкожно

интервал

7дней,

см3

Заражение

вирулентным Сохранность,

штаммом

%

Заболело

Пало

1

нет

100

2

нет

100

Таблица 4

16

18

10

10

5

5

5,0

5,0

телята

ягнята

мыши

Контроль

Мыши

Телята

поросята

0,3

1

2

80

10

0

5

0

5

0

Эффективность анатоксин-вакцины в производственном опыте

Испытание анатоксин-вакцины против эшерихиоза провели на 8

супоросных свиноматках и 10 стельных коровах. Супоросным свиноматкам

вакцину вводили подкожно за два месяца до опороса двукратно с интервалом

7 суток, а стельным коровам трехкратно по 7,0 см3 с интервалом 7-9 суток. У

привитых животных не было абортов, в местах введения вакцины

некротических поражений не отмечено. У народившегося молодняка не

отмечалось симптомов характерных для развития колибактериоза.

Анализ

протективной

активности

колибактериозной

вакцины

в

зависимости от способа вакцинации поросят представлен в таблице 5.

Из данных, представленных в таблице 5, следует, что колибактериозная

анатоксин-вакцина обеспечивала защиту поросят при энтеральной и

подкожной вакцинации. Однако, при энтеральной вакцинации защитный

эффект составил свыше 90%, а при подкожной - в пределах 82%.

23

Заболело

12

11

13

9

пало

2

4

3

3

Протективная активность колибактериозной вакцины

в зависимости от способа вакцинации

способ

Кол-во

вакцинации

голов

поросят

Подкожно

Способ заражения

Подкожно

15×104. E. coli

+

-

+

-

Энтерально с водой

15×104. E. coli

79

11

172

двукратно

объеме 10 мл

контроль

в

Энтерально

с

водой в течение

7 суток в объеме

30-40мл

-

+

-

+

контроль

9

Таким образом, возможность полной и необратимой детоксикации,

полимеризации энтеротоксинов эшерихий путём использования на первой

стадии детоксикации 0,2% -ного раствора формалина вместо 0,8±0,2%-ного и

во

второй

стадии

0,5±0,1%-ного

этония,

обадающего

одновременно

консервирующими,

бактерицидными

и

фунгицидными

свойствами,

позволила предложить рациональную технологию изготовления эффективной

и безвредной колибактериозной анатоксин-вакцины без ртутьсодержащего

консерванта - мертиолята.

При

изучении

протективной

активности

инактивированной

колисальмонеллезной

анатоксин-вакцины

установлена

устойчивость

вакцинированных 47 телят и 58 поросят к подкожному заражению 1,0 мл

суспензии патогенных сальмонелл и кишечной палочки, содержащих по 5,0

×105 – 1,0×106 микроорганизмов и при однократной выпойке с водой

вакцинированным 42 телятам и 75 поросятам 2,0 мл суспензии сальмонелл и

2,0 мл кишечной палочки, содержание микроорганизмов в которых

составляло 1,0×109/мл.

24

Таблица 5

3.1.3. Получение и изучение лечебно-профилактической эффективности

стафилококковой анатоксин-вакцины (САВ)

Сравнительная оценка существующих способов получения анатоксинов

и инактивированных анатоксин-вакцин и изыскание новых средств детокси-

кации и полимеризации выявил эффективность глутарового альдегида от-

дельно и в сочетании с бесчетвертичными аммонийными соединениями, в

частности этония, биопага - Д, алкилдиметилбензиламмония и т.д., которые

были взяты для получения эффективной стафилококковой анатоксин-

вакцины. Повышение протективной, лечебной эффективности и безвредно-

сти анатоксин-вакцины достигается путём замены канцерогенного и недоста-

точно эффективного в отношении стафилококковых энтеротоксинов фор-

мальдегида на безвредный глутаровый альдегид в 0,2-0,3%-ной концентра-

ции с последующей обработкой 0,2%-ным раствором этония или 0,2%-ным

раствором алкилдиметилбензиламмония для детоксикации и полимеризации

комплекса стафилококковых токсинов, сорбцией на гидроксиде алюминия из

расчета 3-5 мг/мл.

Лечение птицы при стафилококкозе

У больных 15-30 дневного возраста бройлеров отмечено поражение

суставов, падёж, от больной птицы выделены плазмокоагулирующие и

токсигенные золотистые стафилококки. Аэрозольное распыление вакцины в

пяти цехах с 40 тысячами цыплят проводили из расчёта 1,5 литра на птичник

объёмом 5000 м3 двукратно с интервалом 7-9 дней.

После вакцинации заболевания и падежа птицы не отмечено.

Контрольное подкожное заражение вирулентными стафилококками

100вакцинированных бройлеров после аэрозольного распыления вакцины не

вызвало заболевания и падежа птицы.

Лечение ожоговых, рваных ран у свиней и собак

Изучение эффективности комплексной анатоксин-вакцины при лечении

гнойно-некротических и ожоговых ран проводили в сравнении с наиболее

25

ожоговых ран диаметром 5-7 см

Грануляционная ткань появлялась на

7-8 день лечения и покрывала всю

раневую поверхность к 20 дню

Грануляционная ткань появлялась на

10-12 день лечения и покрывала всю

раневую поверхность к 25 дню

Грануляционная ткань появлялась на

7-9 день лечения и покрывала всю

раневую поверхность к 20 дню

Грануляционная ткань появлялась на

10-11 день лечения и покрывала всю

раневую поверхность к 20-23 дню

Грануляционная ткань появлялась на

1

САВ в виде примочек 2 раза в

день

2

Барсучий жир с антибиотиками и

стрептоцидом через день

3

САВ в смеси с

диметилсульфоксидом в

соотношении 1:1 - ежедневно

4

Аэрозоль кубатола через 24 часа

ежедневно

5

САВ в смеси со стрептококковой

распространенными традиционными методами и средствами лечения гнойно-

некротических ран у свиней и плотоядных.

Гнойно-некротические и ожоговые раны у свиней и плотоядных

вызывали приложением на 2-3 минуты в выбритые поверхности тазовых

конечностей нескольких слоев марли, смоченной 2-3%-ным раствором едкого

натрия и 2-3%-ным раствором карболовой кислоты.

Результаты лечения представлены в таблице 6, из которых следует, что

стафилококковая анатоксин-вакцина при лечении ожоговых ран более

эффективна по сравнению с барсучим жиром и кубатолом.

Таблица 6

Сравнительная эффективность лечения гнойно-некротических, ожоговых ран у

свиней и плотоядных с помощью САВ, барсучьего жира с антибиотиками и

кубатолом

№ п/п

Способ и средство лечения

Характер

и

сроки

заживления

анатоксин-вакциной в соотношении

6-7 день лечения и покрывала всю

1:1 ежедневно в виде примочек

раневую поверхность к 20 дню

Из

полученных

результатов

следует,

что

предложенный

метод

изготовления

стафилококковой

анатоксин-вакцины

позволил

получить

эффективный лечебно-профилактический биопрепарат.

Таким образом, стафилококковая анатоксин-вакцина, изготовленная

путём выращивания стафилококков на синтетической среде, детоксикации,

инактивации

энтеротоксинов

вначале

0,2-0,3%-ным

раствором

формальдегида или 0,2-0,3%-ным раствором глутарового альдегида, а затем

26

Количество

Название препарата и

Продолжительность

способ лечения

лечения (дней)

Количество

выздоровевших

животных

28

27

22

28

29

п/п

1

2

3

4

5

животных

30

30

30

30

30

Стафилококковая

анатоксин-вакцина (САВ)

интрацистернально в

сосок по 4-5 мл

ежедневно

7-8

0,2-0,3% раствором этония, обладала высокими лечебно-профилактическими

свойствами и может быть рекомендована в ветеринарной практике.

3.1.4. Изучение эффективности применения стафило-стрептококковой,

коли-стафило-протейно-синегнойной анатоксин-вакцин

Учитывая, что большинство инфекционных болезней протекает на фоне

ассоциации бактерий, были изготовлены и с успехом апробированы стафило-

стрептококковая, коли-стафило-протейно-синегнойная анатоксин-вакцины не

только для лечения коров, больных маститами, поросят-бронхопневмонией,

но и при гнойно-некротических поражениях кожи, трофических язвах,

трещинах сосков вымени и дерматитах плотоядных.

Таблица 7

Сравнительная оценка эффективности анатоксин-вакцины при лечении коров, больных

маститом

САВ с 10 мг/л

5-6

коллоидными ионами

серебра

Мастисан – А ежедневно

9-11

по 15 мл

Стафило-стрептококковая

6-7

анатоксин-вакцина

коли-стафило-протейно-

синегнойная анатоксин-

вакцина

5-6

Из данных, представленных в таблице 7, следует, что САВ при лечении

коров, больных катаральным и гнойно-катаральным маститом превосходит

терапевтическую эффективность мастисана–А на 25-30%. При этом следует

учитывать, что мастисан – А содержит антибиотики, которые выделяются с

27

молоком в течение нескольких дней. В то же время при применении САВ

молоко можно использовать без ограничения.

Более эффективным оказалось применение стафилококковой анатоксин-

вакцины (САВ) в смеси с диметилсульфоксидом в соотношении 1:1, стафило-

стрептококковой и коли-стафило-протейно-синегнойной анатоксин-вакцин.

Повышение

лечебно-профилактической

эффективости

коли-стафило-

протейно-синегнойной

анатоксин-вакцины при её

изготовлении было

достигнуто заменой формальдегида на раствор глутарового альдегида,

применением

раствора

этония

или

Биопага-Д

или

алкилдиметилбензиламмония.

Характерным

показателем

качества

молока

является

уровень

соматических клеток. Количество соматических клеток в молоке, выдоенном

из вымени коров, вылеченных от мастита разработанными нами вакцинами,

колебалось между 104 и 105 в 1 см3. В тоже время в молоке больных маститом

коров выявляли не менее 6,0×105 соматических клеток в 1 см3, что является

недостаточным

для

технологии

получения

качественных

молочных

продуктов (Philpot N. в 2005).

Специфическую профилактику бронхопневмонии и бронхита телят

проводили стафило-стрептококковой (39 голов) и ассоциированной коли-

стафило-протейно-синегнойной анатоксин-вакцинами (40 голов) в объёме 5,0

мл путём двукратного подкожного введения с интервалом 13-15 суток с

одновременным индивидуальным аэрозольным распылением биопрепаратов

в объёме 7-10 мл теленку. При подозрении на заболевание телят парагриппом

и инфекционным ринотрахеитом с лабораторным подтверждением диагноза

проводили

дополнительно

вакцинацию

телят

соответствующими

противовирусными моновакцинами. Наблюдение за телятами осуществляли в

течение 3-х месяцев. При этом установлено, что среди больных телят (40

гол.) бронхопневмонией после вакцинации анатоксин-вакцинами падежа и

рецидивов заболевания не выявлено, клинических симптомов пневмонии не

отмечено.

28

3.2. ПРИМЕНЕНИЕ НОВОЙ БИОЛОГИЧЕСКОЙ

МОДЕЛИ АЛЛЕРГИИ

В настоящее время общепринятых схем и способов сенсибилизации

животных нет. В то же время, предложенный авторами (Бырдаров,1965,

Беклемишев Н.Д.,1985; Фрадкин В.А., 1990 и др.) метод сенсибилизации

морских свинок при стафилококкозе с использованием неполного адъюванта

Фрейнда, ланолина, парафина не получил практического применения, так как

он неизбежно приводил к образованию гнойных абсцессов и гибели

животных.

Для устранения указанного недостатка для сенсибилизации морских

свинок была взята 5,0×106/мл взвесь инактивированных нагреванием

стафилококков, сорбированных на гидроксиде алюминия (3-5мг/мл) без

компонентов адъюванта Фрейнда.

Установлено, что в течение 4-5 месяцев у сенсибилизированных

морских

свинок

сохраняется

чувствительность

кожи

на

введение

стафилококкового аллергена, что позволяло оценить аллергенную активность

биопрепарата,

контролировать

полноту

детоксикации

и

инактивации

стафилококковых

токсинов. Внутрикожное введение стафилококкового

аллергена в объёме 0,1 мл в разведении 1:10, 1:20, 1:40 вызывало у

сенсибилизированных морских свинок гиперемию кожи в диаметре 11±0,5,

9,0±0,5 ; 8,0±0,5 и 7,0±0,5 мм соответственно.

Из данных, представленных в таблице 8, следует, что детоксикация и

инактивация стафилококковых токсино-аллергенов 0,3%-ным раствором

формальдегида или 0,2-0,3 %-ным раствором глутарового альдегида, а затем

раствором 0,2-0,3 %-ного этония приводило к полной инактивации исходной

аллергенной активности на внутрикожное введение 0,1

сенсибилизированных морских свинок.

29

мл анатоксина у

Таблица 8

Оценка полноты детоксикации и инактивации стафилококковых

токсино-аллергенов с помощью биологической модели

Величина диаметра воспалительных

реакций у морских свинок на

внутрикожное введение стафилококковых

токсино-аллергенов ( мм )

п/п

Наименование препарата

1:10

1:20

1:40

9,0±0,5

8,0±0,5

7,0±0,5

7,0±0,5

Реакция

Реакция

отсутс-

отсут-

твует

ствует

Раствор

без

разведения

11±0,5

9,0±0,5

1

2

3

Стафилококковый токсино-аллерген

до детоксикации

Стафилококковый токсино-аллерген

после детоксикации 0,3%

раствором формальдегида

Стафилококковый токсино-аллерген

после детоксикации 0,3%

раствором формальдегида ( или

глутарового альдегида )с 0,2%

раствором этония

Реакция

Реакция

Реакция

Реакция

отсутствует

отсутс-

отсут-

отсут-

твует

ствует

ствует

Сорбированный на гидроксиде алюминия, токсин стафилококков у

сенсибилизированных морских свинок не вызывал образование гнойных

абсцессов

на

месте

введения,

а

состояние

чувствительности

к

стафилококковому аллергену по величине диаметра воспалительной реакций

(гиперемии

кожи)

позволяло

определить

аллергенную

активность

биопрепарата

и

изучить

полноту

детоксикации

и

инактивации

стафилококковых анатоксинов для получения безопасной стафилококковой

анатоксин-вакцины.

3.3. ПОЛУЧЕНИЕ МОДИФИЦИРОВАННЫХ АНТИБИОТИКОВ

И ИССЛЕДОВАНИЕ ИХ ЛЕЧЕБНОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ

Известно

несколько

механизмов

приобретённой

резистентности

бактерий к антибактериальным средствам, среди которых наиболее важными

являются:

изменение

проницаемости

клеточной

стенки

бактерий

(модификация пориновых каналов) для антибактериальных препаратов;

модификация клеточных мишеней действия антибиотиков (пенициллины,

30

макролиды), например, 50 S-субъединицы рибосом (И.А. Гучев, Н.А.

Гришина,

2006);

продукция

бактериями

ферментов

бета-лактамаз,

разрушающих

бета-лактамное

кольцо

пенициллинов,

цефалоспоринов,

карбапенемов; активное выведение антибиотика (efflux) из бактериальной

клетки (Л.С. Стручанский, Ю.Б. Белоусов, С.Н. Козлов, 2000; Л.С.

Стручанский, 2000).

В целом антибиотики – это токсические вещества, продуцируемые

микроорганизмами, в основном плесневыми грибами и актиномицетами. В

процессе их применения у патогенных микроорганизмов, в том числе и у

кишечной палочки, появились ферменты, расщепляющие антибиотики.

Снижение

токсичности

антибиотиков,

их

устойчивость

к

действию

бактериальных ферментов проводили по принципу получения анатоксинов,

то есть путём обработки ряда антибиотиков 0,1-0,2%-ным раствором

формальдегида или 0,1-0,2%-ным глутарового альдегида отдельно, а в

последующем для полноты детоксикации и полимеризации, повышения

эффективности дополнительно использовали второй детоксикатор – этоний

или другое подобное бисчетвертичное аммониевое соединение.

Приготовленные

детоксикацией

и

полимеризацией

линкоспектин,

байтрил,

энрофлоксацин,

эритромицин,

тетрациклин,

гентамицин,

стрептомицин, канамицин, амоксициллин, левомицетин, нистатин и другие

сохраняли прозрачность, не изменяли цвет, не вызывали некротических

изменений на месте введения у морских свинок, кроликов, телят и поросят и

клинически выраженных токсических признаков у животных.

Полученные таким образом антибиотики назвали модифицированными,

положительные

результаты

применения

таких

модифицированных

антибиотиков позволили апробировать целый ряд подобных, о чём подробно

описано в материалах диссертации (см. таблицу 9).

Изучение

бактериостатического

и

бактерицидного

действия

экспериментальных

(модифицированных)

антибиотиков

проводили

в

отношении

свежевыделенных

стафилококков,

сальмонелл,

кишечной

палочки, протея, синегнойной палочки, выделенных от павших телят,

31

мясопептонном агаре

№ п/п

Наименование

Содержание в

Диаметры подавления роста

(в мм)

S. aureus

E. coli

S. dublin

15

18

20

35

35

38

20

25

20

38

48

39

20

25

18

37

40

36

20

25

18

38

48

38

30

27

25

56

49

47

15

22

20

35

39

40

20

27

25

39

53

48

антибиотика

1

Пенициллин

2

М*-пенициллин

3

Метициллин

4

М*-метициллин

5

Эритромицин

6

М*- эритромицин

7

Амоксициллин

8

М*- амоксициллин

9

Амоксициллин/

клавуланат

10

М*-амоксициллин/

клавуланат

11

Стрептомицин

12

М*- стрептомицин

13

Тетрациклин

14

М*- тетрациклин

бумажном диске,

мкг

10

10

10

10

15

15

5

5

5

5

10

10

30

30

поросят, птицы; канамицино- и стрептомицино-устойчивым микобактериям

туберкулеза человеческого и бычьего видов, выделенных от больных

туберкулёзом

животных

на

кафедре

изучения

туберкулеза

Курского

государственного медицинского университета и межрайонных ветеринарных

лабораторий.

Результаты исследований представлены в таблице 9, из которых следует,

что под воздействием модифицированных антибиотиков величины диаметров

подавления

роста

мм)

бактерий

вдвое

превышали

подобные

характеристики, полученные при воздействии обычных антибиотиков.

Таблица 9

Сравнительная оценка эффективности коммерческих и модифицированных

антибиотиков по величине диаметра подавления роста микроорганизмов на

М*-модифицированный с помощью 0,2% формальдегида

В среднем на указанные коммерческие антибиотики величина диаметра

задержки роста микроорганизмов вокруг бумажных дисков составляла 15-

32

20мм, а на аналогичные концентрации модифицированных антибиотиков -

30-40 мм, т.е. вдвое больше.

Исследованиями

установлено

увеличение

зоны

задержки

роста

мультирезистентных

E.coli

к

модифицированным

детоксикацией

и

полимеризацией антибиотиков: зона задержки роста составила 0,74±0,04-

0,99±0,06 см к 104 и 105 микроорганизмам в мл соответственно. Однако на

коммерческие антибиотики зона задержки роста составляла 0,2±0,04 см.

В результате опытов было обнаружено отсутствие роста лекарственно-

устойчивых микобактерий бычьего вида в присутствии модифицированных

канамицина и стрептомицина в концентрации 10-15 мкг/мл. В тоже время на

плотных и жидких питательных средах обнаруживали рост лекарственно-

устойчивых

микобактерий

в

присутствии

обычных

коммерческих

канамицина и стрептомицина (в концентрации 10-15 мкг/мл и значительно

выше

45-60,

100,

150

мкг/мл).

Подкожное

ежедневное

введение

модифицированного стрептомицина в течение 30 суток купировало гнойно-

кавернозные поражения печени, селезёнки и лёгких у морских свинок, после

заражения 0,1-1,0 мг микобактериями туберкулеза бычьего вида в течение 90

суток (срок наблюдения).

Сравнительная оценка спектра биоцидного действия коммерческого и

модифицированного левомицетина, представлена в таблице 10.

Из

данных,

представленных

в

таблице

10,

следует,

что

модифицированный левомицетин подавлял рост бактерий, оказывал

вирулицидное действие к поксвирусам, парвовирусу собак, панлейкемии

кошек и фунгицидное действие по отношению к плесневым грибам в

минимальных концентрациях.

Исследовали биоцидное действие водного раствора, содержащего

0,1%-ный глутаровый альдегид, 0,1%-ный алкилдиметилбензиламмоний

хлорид,

2%-ный

этоний,

0,2%-ный

метронидазол

в

отношении

микроорганизмов:

свежевыделенных

и

лабораторных

культур

стафилококков, кишечной палочки, сальмонелл, Asp. niger, Asp. Flavus,

33

Биоцидное действие коммерческого и модифицированного левомицетина

Активность

в

отношении

возбудителей

S.aureus

E.coli

S.enteriditis

Парвовирус собак

Поксвирус

миксоматоз

Asp.niger

Asp.flavus

Левомицетин

Коммерческий

Количество

микроорга-

низмов, микробных тел/мл

или 106ИД50/мл

модифицирован-

ный,

мкг/мл

левомицетин,

мг/мл

1-1,5

1,0-1,2

1,2-1,3

Не действует

Не действует

Не действует

Не действует

105

250-500

105

200-300

105

250-350

106ИД50/мл

250-300

106ИД50/мл

200-250

Сплошной рост

Сплошной рост

10-25

10-25

возбудителей фиброматоза и миксоматоза кроликов, вирусов чумы и

энтерита собак, панлейкемии кошек и инфекционного ринотрахеита

крупного рогатого скота, содержащих 103-105 инфекционных доз в 1 мл.

Таблица 10

Примечание: ИД50-содержание инфекционных доз в мл культуральной жидкости

В результате было установлено, что биоцидное действие такого

многокомпонентного препарата проявляется в отношении указанных

микроорганизмов при экспозиции in vitro в течение 20-30 минут. В

дальнейшем были сконструированы нетоксичные многокомпонентные

лекарственные средства, содержащие этоний, глутаровый альдегид,

хлоргексидин,

алкилдиметилбензиламмоний

хлорид,

метронидазол,

Биопаг-Д, диметилсульфоксид для лечения трещин сосков вымени у коров,

маститов, эндометритов, дерматитов, гнойно-некротических и ожоговых

поражений кожи. Лекарственные средства обеспечивали биоцидное

действие на вирусы, аэробные и анаэробные микроорганизмы, споры,

плесневые грибы, одновременно ускоряли регенерацию тканей, и имели

34

сокращённый период полувыведения из организма животного, что

позволило предложить для практики новую лекарственную форму - крем-

суспензию.

Таким образом, используемый способ и средства детоксикации,

полимеризации

антибиотиков

позволили

обеспечить

устойчивость

модифицированных антибиотиков к бактериальным ферментам, снизить

токсичность, повысить их бактерицидную, фунгицидную, вирулицидную

активность и соответственно лечебную эффективность.

3.4. Результаты разработки и апробации лекарственных препаратов без

антибиотиков для лечения коров, больных маститом, рваных и ожого-

вых ран, дерматитов и экзем

Недостатком существующих линиментов, кремов-суспензий, мазей и

т.д. является наличие в их составе гормонов или антибиотиков, которые не-

гативно влияют на качество молока и молочных продуктов. В процессе ис-

следований установлено, что прогревание 1-2% -ного этония с 0,1%-ным глу-

таровым альдегидом не снижали их биоцидных свойств в отношении стафи-

лококков, кишечной палочки, сальмонелл и плесневых грибов. Исходя из по-

лученных результатов, были приготовлены мази и крема-эмульсии, содер-

жащие 1-2 % этония, 0,1% глутарового альдегида, 80% расплавленного вазе-

лина и 10% растительного масла или 90 мл геля. После расфасовки мази в

баночки, шприцы, тубы препараты не прорастали посторонней микрофлорой,

сохраняли внешний вид при хранении от 5ºС до 25ºС в течение 3-х лет. Мази

с 0,3-0,2% -ным этонием и 0,1% -ным раствором глутарового альдегида уско-

ряли заживление ожоговых и рваных ран, дерматитов, экзем и лечение коров,

больных маститом. Полученные результаты и апробация мазей и кремов-

суспензий при лечении коров, больных маститом, а также рваных и ожого-

вых ран, дерматитов, экзем обнадёжили перспективу создания лекарственно-

го средства без антибиотиков. В последующем были изготовлены и успешно

апробированы кремы-эмульсии с диметилсульфоксидом и 5-10 мг/л колло-

идными ионами серебра. Применение геля с коллоидными ионами серебра 10

35

мг на 1 л 0,1%-ного глутарового альдегида и 2%-ного этония позволяло в два

раза ускорить процессы заживления рваных и ожоговых ран, дерматитов, эк-

зем у плотоядных, а также способствовало быстрому лечению коров, боль-

ных разными формами мастита.

4. ВЫВОДЫ

1.

Разработана

универсальная

синтетическая

питательная

среда,

рациональный

состав

которой

обеспечивал

стабильное

накопление

микроорганизмов:

стафилококков

и

стрептококков

11-12×109/мл,

сальмонелл и кишечной палочки - до 70±10 ×109/мл, сенной палочки – B.

Subtilis и лактобактерий до 90-100 ×109/мл, протея до 78,4±1,03 ×109/мл и

синегнойной палочки до 64,6±1,14 ×109/мл микробных клеток.

2.

Проведённая

сравнительная

оценка

известных

детоксикаторов

бактериальных

токсинов

и

испытание

новых

выявила

высокую

эффективность

этония

(1,2-этилен-бис-(N-диметилкарбдецилоксиметил)

аммония дихлорид), Биопага–Д и алкилдиметилбензиламмония хлорида.

Предложена

рациональная

технология

изготовления

эффективных

и

безвредных

анатоксин-вакцин

без

ртутьсодержащего

консерванта

мертиолята, включающая использование на первой стадии детоксикации

0,2% -ного глутарового альдегида вместо 0,8±0,2%-ного раствора формалина

и во второй стадии- 0,5±0,1% -ного этония, обладающего одновременно

консервирующими, бактерицидными и фунгицидными свойствами.

3.

Стафилококковая

анатоксин-вакцина,

полученная

вышеуказанным

методом, способствовала ускоренному заживлению ран, обеспечивала

лечение маститов у коров при ежедневном интрацистернальном введении в

каждый сосок вымени в объёме 3-5мл в течение 4-5 суток и профилактику

птицы от стафилоккоза путём 2-х кратного аэрозольного распыления в

течение 40-50 минут с интервалом 7-9 суток в объёме 1,5 л на птичник

площадью 5000м2 с 40 тысячами цыплят 15-30 дневного возраста.

36

4.

Стафило-стрептококковая

и

коли-стафило-протейно-синегнойная

анатоксин-вакцины

обеспечивали

ускоренное

заживление

гнойно-

некротических и трофических поражений кожи, дерматитов и проявляли

лечебно-профилактическую эффективность у коров, больных маститом.

Вакцины

помимо

лечебно-профилактического

действия

оказывали

существенное влияние на качество молока, уменьшая в нём количество

соматических клеток благодаря повышению устойчивости к условно-

патогенным и специфическим возбудителям мастита. Поэтому в комплекс

мер, применяемых для профилактики маститов, наряду с технологическими

приёмами необходимо включать метод иммунопрофилактики, который

обеспечивает получение качественного молока благодаря не только

повышению уровня защищающих специфических антител, но и способствует

эффективному фагоцитозу и нейтрализации бактериальных токсинов.

5. Полимеризация энтеротоксинов позволяла придать иммуногенность

термостабильному энтеротоксину - гаптену по своей природе и одному из

ведущих факторов в патогенезе колидиарей телят и ягнят. Колибактериозная

и сальмонеллёзная анатоксин-вакцина отдельно и колисальмонеллёзная

вакцина обеспечивали защиту животных от экспериментального подкожного

и

орального

заражения

энтеропатогенными

культурами

E.сoli

и

сальмонеллами в дозе 0,5-1,0 ×106/мл микроорганизмов на одно животное.

6.

Для

контроля

процесса

полной

инактивации,

стандартизации

стафилококковых анатоксинов, изучения аллергических реакций предложена

биологическая модель аллергии. Она рекомендована для внутрикожной

аллергической диагностики стафилококкоза у животных, в том числе у

плотоядных и птиц. Сенсибилизация морских свинок 5,0 ×109/мл взвесью

инактивированных стафилококков, сорбированных на гидроксиде алюминия

(3-5мг/мл), путём подкожного введения обеспечивала чувствительность

животных на внутрикожное введение 0,1мл стафилококкового анатоксина

цельного, в разведении 1:10 или 1:20 с образованием гиперемии кожи в

диаметре

11,0±0,5,

9,0±0,5;

8,0±0,5

мм

соответственно.

Указанная

37

чувствительность у морских свинок сохранялась до 5 месяцев. Способ,

исключал

образование

гнойных

абсцессов

и

гибель

животного

на

внутрикожное введение стафилококкового аллергена из-за отсутствия в его

составе

адъюванта

Фрейнда,

жидкого

парафина

и

ланолина.

Стафилококковый аллерген может использоваться в цельном виде и в

разведении

1:10

для

внутрикожной

аллергической

диагностики

стафилококкоза у животных.

7. Повышение эффективности антибиотиков, снижение их токсичности,

приобретение устойчивости к расщепляющему действию бактериальных

ферментов, создание стабильной структуры антибиотиков достигались

полимеризацией и детоксикацией ряда антибиотиков с помощью 0,15±0,05%-

ного раствора формалина при 40±2,0°С в течение 5-7 суток или 0,2%-ным

раствором глутарового альдегида при 40,0±2,00С в течение 2-3 суток, а затем

0,2%-ным раствором этония. Модифицированные антибиотики благодаря

полимеризации и детоксикации обладали повышенной биоцидной и лечебной

эффективностью, сниженной токсичностью и аллергенностью, сохраняли

прозрачность

растворов

в

течение

3–х

лет

и

характеризовались

дополнительной вирулицидной и фунгицидной активностью.

8. Детоксикация и полимеризация стрептомицина и канамицина 0,2%-ным

раствором формальдегида или 0,2%-ным раствором глутарового альдегида

при 40,0±2,00С в течение 2-3 суток, а затем 0,2%-ным раствором этония

задерживала рост стрептомицино- и канамицино-устойчивых микобактерий

туберкулеза

бычьего

вида.

Подкожное

ежедневное

введение

модифицированного стрептомицина в течение 30 суток купировало гнойно-

кавернозные поражения печени, селезёнки и лёгких у морских свинок, после

заражения их 0,1-1,0 мг микобактериями туберкулеза бычьего вида в течение

90 суток (срок наблюдения).

9. Мази, крема-эмульсии, гели с рядом модифицированных антибиотиков

(левомицетином,

энрофлоксацином,

тетрациклином,

линко-спектином,

гентамицином, метромидазолом) показали высокую эффективность при

лечении ран, экзем, кератитов, трофических язв, дерматитов, гнойно-

38

некротических поражений кожи, маститов, эндометритов при применении в

животноводческих хозяйствах.

10. Сконструированы нетоксичные

многокомпонентные лекарственные

средства,

содержащие

этоний,

глутаровый

альдегид,

хлоргексидин,

алкилдиметилбензиламмоний

хлорид,

Биопаг-Д,

метронидазол,

диметилсульфоксид, коллоидные ионы серебра для лечения трещин сосков

вымени у коров, маститов, эндометритов, дерматитов, ожоговых поражений

кожи и экзем. Лекарственные средства обеспечивали биоцидное действие на

вирусы, аэробные и анаэробные микроорганизмы, споры, плесневые грибы,

ускоряли регенерацию тканей и имели сокращённый период полувыведения

из организма животного.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

На базе ФГБОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная

академия имени И.И. Иванова» создано опытно-промышленное производство

лечебно-профилактических препаратов.

Разработанный и апробированный состав универсальной синтетической

питательной

среды

рекомендован

для

оптимального

накопления

стафилококков, сальмонелл, стрептококков, протея, кишечной, синегнойной

палочки с целью получения эффективных лечебно-профилактических

биопрепаратов.

Предложенная

биологическая

модель

аллергии

может

быть

использована для оценки аллергенной активности биологических препаратов.

Проведённые

испытания

стафилококковой,

колисальмонеллёзной,

стафилострептококковой, коли-стафило-протейно-синегнойной анатоксин-

вакцин, подтвердили их лечебно-профилактическую эффективность.

Для профилактики и лечения гнойно-септических болезней, маститов

предложены ассоциированные вакцины, включающие анатоксины эшерихий,

стрептококков, стафилококков, протея и синегнойной палочки.

39

Для повышения эффективности антибиотиков, снижения их токсично-

сти и аллергизации организма, приобретения устойчивости к расщепляюще-

му действию бактериальных ферментов, созданию стабильной структуры

предложен новый подход: полимеризация и детоксикация антибиотиков. Ап-

робированные мази и суспензии с модифицированными антибиотиками по-

казали высокую лечебную активность и безвредность.

Представленные технологии получения новых эффективных лечебно-

профилактических препаратов, в том числе многокомпонентных, включаю-

щих коллоидные ионы серебра, предлагаются для практического использо-

вания в ветеринарии.

Для практического использования разработаны и утверждены в

установленном порядке следующие нормативные документы: «Проект

опытно-промышленного

регламента

на

производство

левомицетиноэтониевого крема-эмульсии и раствора модифицированного

левомицетина»; «Проект опытно-промышленного регламента на производство

модифицированного линко-спектина с этонием и диметилсульфоксидом на

мазевой

основе»;

«Проект

опытно-промышленного

регламента

на

производство

глутароэтониевого

крема-эмульсии»;

«Проект

опытно-

промышленного

регламента

на

производство

модифицированного

стрептомицина и канамицина»; «Проект опытно-промышленного регламента

на производство универсальной синтетической питательной среды для

выращивания

микроорганизмов»;

Проект

Стандарта

организации

«Стафилококковая

анатоксин-вакцина»,

Проект

Стандарта

«Колибактериозная

анатоксин-вакцина

для

оральной

и

подкожной

вакцинации», Проект Стандарта «Универсальная синтетическая питательная

среда

для

выращивания

микроорганизмов»;

Проект

Стандарта

«Глутароэтониевый

крем-эмульсия»;

«Проект

Опытно-промышленного

регламента на производство ассоциированной анатоксин-вакцины для

профилактики и лечения гнойно-септических болезней животных»; Проект

Стандарта «Ассоциированная анатоксин-вакцина для профилактики и

лечения гнойно-септических болезней животных»; «Временное наставление

40

по применению колибактериозной анатоксин-вакцины для оральной и

подкожной

вакцинации

поросят»,

«Инструкция

по

применению

стафилококковой

анатоксин-вакцины»,

«Инструкция

по

применению

стафило-стрептококковой анатоксин-вакцины», «Временное наставление по

применению

экспериментального

энрофлоксацина

и

амоксициллина»;

«Инструкция по применению модифицированного линко-спектина с этонием

и диметилсульфоксидом на мазевой основе», «Наставление по применению

левомицетино-этониевого крема-эмульсии и раствора левомицетина».

6. СПИСОК ОСНОВНЫХ ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

6.1. Список научных публикаций в рецензируемых журналах,

рекомендованных ВАК

1. Евглевский, Д.А. Особенности повышения эффективности средств специ-

фической профилактики и терапии колибактериозов и сальмонеллезов/ Д.А.

Евглевский, М.А. Смирнов, И.А. Разинькова, Е.А. Стрекалова//Вопросы

нормативно-правового регулирования в ветеринарии. – 2009. - №1-2. – С.97-

99.

2. Евглевский, Д.А. Совершенствование средств диагностики, специфической

профилактики и терапии больных колибактериозом животных/ Д.А. Евглев-

ский, М.А. Смирнов, Е.А. Стрекалова, В.А. Кузьмин//Вопросы нормативно-

правового регулирования в ветеринарии. – 2009. - №1-2. – С.99-103.

3. Евглевский, Д.А. Совершенствование средств специфической профилактики

лейкоза крупного рогатого скота/ А.А. Евглевский, В.А. Кузьмин, Д.А. Евг-

левский// Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. –

4. Евглевский, Д.А. Новые подходы к лечению репродуктивных органов и

Коваленко, Д.А. Евглевский// Вестник Курской

5. Евглевский, Д.А. Современные аспекты повышения эффективности анти-

биотиков/ Д.А. Евглевский, А.А. Евглевский// Вестник Курской ГСХА –

2010. - №6. – С.64-65.

6. Евглевский Д.А. Повышение эффективности канамицина к микобактериям

туберкулеза/ Д.А. Евглевский, А.А. Евглевский, Смирнов И.И.// Вестник

Курской ГСХА – 2011. - №1. – С.63-64.

2009. - №4. – С.100-102.

молочной железы/ А.М.

ГСХА – 2010. - №5. – С.75-76.

Научно-биотехнологическое обоснование повышения

7. Евглевский, Д.А.

эффективности и снижение токсичности антибиотиков/ Д.А. Евглевский,

А.А. Евглевский// Вестник Курской ГСХА – 2011. - №2. – С.69-71.

41

8. Евглевский, Д.А. Иммуногенные и протективные свойства вакцины для

профилактики лейкоза крупного рогатого скота/ А.А. Евглевский, Д.А. Евг-

левский, Сычев М.Д., Коваленко А.М.// Вестник Курской ГСХА – 2011. -

№3. – С.68-69.

9. Евглевский, Д.А. Иммунологические сдвиги при сальмонеллёзе /А.М. Кова-

ленко, Д.А. Евглевский, Б.М. Тагирмирзоев//Вестник Курской ГСХА– 2011.

- №4. – С.61-62.

10.Евглевский, Д.А. Универсальная синтетическая среда для выращивания

патогенных и пробиотических микроорганизмов при получении биопрепара-

тов/ Д.А. Евглевский, А.А. Евглевский, В.В. Семенютин, И.И. Смир-

нов//Вестник Курской ГСХА– 2011. - №4. – С.63-64.

11.Евглевский, Д.А. Создание биологической модели аллергии к стафилокок-

ковому аллергену/Д.А. Евглевский, Б.М. Тагирмирзоев//Вестник Курской

ГСХА–2011.–№5. –С.71-73.

12.Евглевский, Д.А. Разработка и апробация средства и способов аллергиче-

ской диагностики, специфической профилактики и терапии стафилококкозов

у животных./Д.А. Евглевский, Б.М. Тагирмирзоев// Вестник Курской

ГСХА–2011.–№5. –С.75-77.

13.Евглевский, Д.А. Повышение бактерицидного, вирусоцидного и фунгицид-

ного действия антибиотиков с помощью глутарового альдегида и этония/

Д.А. Евглевский /Вестник Курской ГСХА–2011.–№6. –С.72-74.

14.Евглевский, Д.А. Физиологические свойства стафилококков, сальмонелл и

кишечной палочки, подвергнутых магнитному воздействию/Д.А.Евглевский,

С.И. Худяков, А.Г. Беляев// Вестник Курской ГСХА–2011.–№6. –С.72-74.

15.Евглевский, Д.А. Потенцирование эффективности средств и способов про-

филактики и лечения инфекционных болезней животных/Г.И. Горшков, Д.А.

Евглевский// Вестник Курской ГСХА–2012.–№1. –С.100-102.

16.Евглевский, Д.А.

Биотехнологическая закономерность, редуцирование

токсичностей и потенцирование биоцидного действия антибиотиков/Д.А.

Евглевский// Вестник Курской ГСХА–2012.–№1. –С.103-105.

17.Евглевский, Д.А. Достижения и перспективы диагностики, профилактики и

терапии туберкулёза/Д.А. Евглевский, А.А. Евглевский, А.М. Коваленко,

В.А. Дёмин// Вестник Курской ГСХА–2012.–№2. –С.105-107.

18.Евглевский Д.А. Потенцирование биоцидного и лечебного действия лин-

коспектина /Д.А. Евглевский, А.В. Позреев, А.Ч:Ли, Л.В. Резниченко//

Вестник Курской ГСХА–2012.–№2. –С.114-116.

19.Евглевский Д.А. Повышение эффективности средств и способов диагности-

ки, профилактики, терапии стафило-стрептококкозов у животных/Д.А. Евг-

левский// Вестник Курской ГСХА–2012.–№3. –С.114-116.

42

20.Евглевский, Д.А. Совершенствование средств и способов диагностики и

профилактики и терапии гнойно-септических болезней у животных/Д.А.

Евглевский//Международный Вестник ветеренарии.С-Петербург-2012.- №2,

-С.10-14.

21.Евглевский, Д.А. Основы повышения эффективности стафилококковых

биопрепаратов/Д.А. Евглевский, А.В. Поздеев, Б.М. Тагирмирзоев// Вестник

Курской ГСХА–№4.–2012–С.109-112.

22.Евглевский, Д.А. Потенцирование эффективности диагностики, профилак-

тики и терапии бактериальных болезней животных/Д.А. Евглевский// Вест-

ник Курской ГСХА–№4.–2012–С.112-

23. Евглевский, Д.А. Потенцирование эффективности редуцирование токсичн-

сти антибиотиков полимеризацией /Д. А. Евглевский// Вестник Курской

ГСХА -2012.-№5-С. 66-67

24.Евглевский, Д.А. Биотехнологическое обоснование потенцирования био-

цидной и лечебной эффективности стрептомицина и каномицина/ Д.А. Евг-

левский, А. А. Евглевский, И.В. Ермилов// Вестник Курской ГСХА -2012.-

№5.-С. 75-76

25. Евглевский, Д.А. Повышение эффективности средств и способов диагно-

стики, профилактики и лечения стафилострептококкозов плотоядных/ Д.А.

Евглевский, И.В. Ермилов, Д.И. Шахов, С.Ю. Стебловская// Вестник Кур-

ской ГСХА -2012.-№6-С. 77-78

26. Евглевский, Д.А. Стратегия успеха применения пробиотических препара-

тов при антибиотикотерапии колибактериоза поросят и телят/ Д.А. Евглев-

ский, К.В. Татарников, И.В. Ермилов, В.Е. Чернов, С. А. Федосова, Е. А.

Стебловский// Вестник Курской ГСХА -2012-№6.-С. 83-84

27.Евглевский,

Д.А.

Иммуногенные

свойства

туберкулёзных

токсино-

аллергенов, подвергнутых детоксикации и инактивации/Д.А.Евглевский,

А.А. Евглевский, С.Ю. Стебловская//Международный вестник ветеринарии.-

Санкт-Петербург. -2012.-№3-С.6-8.

28. Евглевский, Д.А. Потенцирование лечебного действия модифицированных

энрофлоксацина и линкоспектина при колисальмонеллезе телят/ Д.А. Евг-

левский, Л.В. Коваленко, С.Н. Кретова, К.В.Татарников// Вестник Курской

ГСХА– 2013.- №1. - С. – 70-71.

29.Евглевский, Д.А., Биоцидное и лечебное действие модифицированных

энрофлоксацинов, линкоспектина и гентамицина при колибактериозе и саль-

монеллезе поросят/Д.А. Евглевский., Стебловская С.Ю., Татарников К.В.,

О.Г. Косикова.// Вестник Курской ГСХА– 2013.-№1.- С. 71-72.

30.Евглевский Д.А. Выращивание свинопоголовья с минимальным использо-

ванием антибиотиков/ А.М.Коваленко, Д.А. Евглевский Д.А., Л.А. Шывер-

43

талова, Н.П. Акобджанян, А.О. Павленко // Вестник Курской ГСХА– 2013.

№2. - С. – 71-72.

31.Евглевский, Д.А. Оценка и биотехнологическая стратегия повышения эф-

фективности анатоксин-вакцин, антибиотиков и эубиотиков // Вестник Кур-

ской ГСХА– 2013.- №2. -С. – 72-73.

32.Евглевский, Д.А. Биоцидные и лечебные свойства стафилококковой анаток-

син-вакцины с коллоидными ионами серебра// Вестник Курской ГСХА–

2014.- №5. -С. – 69-70.

33.Евглевский, Д.А. Материалы повышения биоцидного и лечебного действия

левомицетина коллоидными ионами серебра// Вестник Курской ГСХА–

2014.- №6. -С. – 79-80.

34.Евглевский, Д.А. Иммуногенные и протективные свойства эксперименталь-

ной колибактериозной анатоксин-вакцины при оральной и подкожной имму-

низации./ Д.А. Евглевский, Н.В. Ванина//Вестник Курской ГСХА- 2014.-

№7. – с. 69-70.

35.Евглевский, Д.А. Повышение биоцидных и лечебных свойств эксперимен-

тальных метронидазола с глутаровым альдегидом, этонием и коллоидными

ионами серебра./ Д.А. Евглевский, О.В. Леванова// Вестник Курской ГСХА

2014. №7. – с. 70-72

36.Евглевский, Д.А. Терапевтическая эффективность экспериментальных

лечебных препаратов с этонием и коллоидными серебра при инфицирован-

ных ранах плотоядных./ А.Я. Самуйленко, Д.А. Евглевский// Вестник Кур-

ской ГСХА.- 2014. №8. – с. 54-55

37.Евглевский, Д.А. Биоцидная и терапевтическая активность наноструктури-

рованного линкоспектина коллоидными ионами серебра. А.Я. Самуйленко,

Д.А. Евглевский// Вестник Курской ГСХА.- 2014.- №8.– с. 70-72

38.Евглевский, Д.А. Нанобиотехнологическое обоснование повышения эффек-

тивности лекарственных средств и биопрепаратов коллоидными ионами се-

ребра, глутаровым альдегидом и этонием./А.Я. Самуйленко, А.Ю. Айдиев,

Д.А. Евглевский// Вестник Курской ГСХА.- 2014.- №9. – с. 69-70

39.Евглевский, Д.А. Стратегия перспективных нанобиотехнологических разра-

боток получения эффективных анатоксин-вакцины, экспериментальных ан-

тибиотиков и лекарственных препаратов коллоидными ионами серебра./А.Я.

Самуйленко, Д.А. Евглевский// Вестник Курской ГСХА.- 2015.- №1. – с. 72-

73.

Патенты РФ

1. Евглевский Д.А., Евглевский А.А., Майстренко Л.А. Способ получения

стафилококковой

анатоксин-вакцины//

Патент

№2377013.

Приоритет

16.04.2008. – Регистрация в Госреестре изобретений 27.12.2009. Бюл. №36.

44

2. Евглевский Д.А., Евглевский А.А., Коломиец В.М. Способ получения ту-

беркулезного анатоксина// Патент №2360697. Заявка № 2008115050/13. При-

оритет 15.04.2008. – Регистрация в Госреестре изобретений 10.07.2009. Бюл.

№19.

3. Евглевский Д.А., Евглевский А.А., Разинькова И.А. Способ получения

сальмонеллезной

анатоксин-вакцины//

Патент

№2392003.

Заявка

2008112803/13. Приоритет 02.04.2008. Регистрация в Госреестре изобретений

20.06.2010. Бюл. №17.

4. Евглевский Д.А., Евглевский А.А., Воробьева Н.В. Способ профилактики

мастита// Патент №2239422. Заявка № 2003108277/13. Приоритет 25.03.2003.

Регистрация в Госреестре изобретений 10.11.04. Бюл. №31.

5. Евглевский Д.А. , Евглевский А.А., Смирнов М.А., Разинькова И.А., Стри-

калова Е.А. Способ получения колисальмонеллезной анатоксин-вакцины//

Патент РФ №2371197.Заявка № 2008114785/13. Приоритет 15.04.2008. Реги-

страция в Госреестре изобретений 27.10. 2009. Бюл. №30.

6. Евглевский Д.А., Евглевский А.А., Смирнов М.А. Способ получения коли-

бактериозной анатоксин-вакцины // Патент РФ № 2372937. Заявка №:

2008112751/13. Приоритет 02.04.2008. Регистрация в Госреестре изобретений

20.11. 2009. Бюл. №32.

7. Евглевский Д.А., Евглевский А.А., Майстренко Л.А. Способ получения

стафилококковой

анатоксин-вакцины//Патент

№2377014.

Приоритет

29.04.2008. Заявка № 2008117242/13. Регистрация в Госреестре изобретений

27.12.2009. Бюл. №36.

8. Евглевский Д.А., Евглевский А.А., Майстренко Л.А. Способ получения

стафило-стрептококковой анатоксин-вакцины // Патент №2377016. Заявка

№2008115049/13. Приоритет 27.12.2009. Регистрация в Госреестре изобрете-

ний 27.12.2009. Бюл. №36.

9. Евглевский, Д.А., Евглевский А.А., Майстренко Л.А. Способ получения

стафилококкового аллергена// Патент №2378369. Заявка №2008117241/13.

Приоритет 29.04.2008. Регистрация в Госреестре изобретений 10.01.2011.

Бюл. №1.

10.Евглевский Д.А., Евглевский А.А. Способ создания биологической модели

аллергии к стафилококковому аллергену// Патент №2405146. Заявка

№2009117366.Приоритет 6.05.2009.Регистрация в Госреестре изобретений

27.11.2010. Бюл. №33.

11.Евглевский Д.А., Евглевский А.А., Л.А. Майстренко Способ получения

ассоциированной анатоксин-вакцины для профилактики и лечения гнойно-

септических болезней// Патент №2386448. Заявка № 2008117240/13. Приори-

тет 29.04.2008. Регистрация в Госреестре изобретений 20.04.2010. Бюл. №11.

45

20.08.2010. Бюл. №23.

повышения эффективности антибиотиков // Патент №2400218.

12.Евглевский Д.А., Евглевский А.А., Коломиец В.М. Способ получения

туберкулезного анатоксина// Патент №2392002. Заявка № 2008112753/13.

Приоритет 2.04.2008. Регистрация в Госреестре изобретений 20.06.2010. Бюл.

№17.

13.Евглевский Д.А., Евглевский А.А., Коломиец В.М. Способ создания биоло-

гической модели аллергии к туберкулезным аллергенам// Патент №2377660.

Приоритет 27.12.2009. Регистрация в Госреестре изобретений 27.12.2009.

Бюл. №36.

14.Евглевский Д.А., Коломиец В.М., Коваленко А.М., Бусол В.А. //Патент №

Способ получения туберкулезного анатоксина/ В.М. Коломиец, А.М. Кова-

ленко, В.А. Бусол// Патент №2230569. Заявка № 2001116680/13. Приоритет

27.05.2003. – Регистрация в Госреестре изобретений 20.06.2004.

15.Евглевский Д.А., Евглевский А.А. Способ профилактики лейкоза крупного

рогатого скота// Патент №2396978. Регистрация в Госреестре изобретений

16.Евглевский Д.А., Евглевский А.А., Коломиец В.М., Тимкова Е.А. Способ

Заявка №

2009112900/10. Регистрация в Госреестре изобретений 27.09.2010. Бюл. №27.

17.Евглевский Д.А., Евглевский А.А., Коломиец В.М., Коломиец И.В. Способ

повышения эффективности стрептомицина в отношении устойчивых к нему

M. tuberculosis // Патент №2405834. Заявка № 2009118972/10. Регистрация в

Госреестре изобретений 10.12.2010. Бюл. №34.

18.Евглевский, Д.А., Коломиец В.М. Способ профилактики туберкулеза круп-

ного рогатого скота // Патент №2230505. Приоритет 27.05.2003. Регистрация

в Госреестре изобретений 20.06.2004. Бюл. №36.

19.Евглевский Д.А., Евглевский А.А., Тимкова Е.А. Способ повышения эффек-

тивности канамицина в отношении канамициноустойчивых микобактерий

туберкулеза//

Патент

2426789.Заявка

2010115910/10.

Приоритет

21.04.2010.Регистрация в Госреестре изобретений 20.08.2011. Бюл. № 23.

20.Евглевский Д.А., Евглевский А.А., Тимкова Е.А. Способ повышения эффек-

тивности стрептомицина в отношении стрептомициноустойчивых микобак-

терий туберкулеза// Патент № 2426790. Заявка № 2010115912/10, Приоритет

21.04.2010.Регистрация в Госреестре изобретений 20.08.2011. Бюл. №23.

21.Евглевский Д.А. Способ получения стафилококковой анатоксин – вакцины /

Д.А. Евглевский, С.И. Худяков, А.В. Поздеев, Б.Т. Тагирмирзоев.

22.Евглевский Д.А., Евглевский А.А., Тимкова Е.А., Худяков С. И. Способ

получения бактерицидной активности и обеспечения вирулицидного и фун-

гицидного

действия

антибиотиков//Патент

2477124.

Заявка

2011125699/10. Приоритет 33.06.2011. Регистрация в Госреестре изобретений

10.03.2013.

46

23.Евглевский Д.А., Стариков В. А., Леонов А. В. Способ выделения чистой

культуры стафилококков // Патент № 2458990. Заявка №2011120633/10. При-

оритет 20.05.2011. Регистрация в Госреестре изобретений 20.08.2012. Бюл.

№ 23.

24.Евглевский Д.А., Евглевский А.А., Коломиец В.М., Коваленко А.М., Смир-

нов И.И., Абрамов А.В. Способ выделения чистой культуры микобактерий

туберкулеза // Патент № 2455361. Заявка № 2011112282/10. Приоритет

30.03.2011. Регистрация в Госреестре изобретений 10.07.2012. Бюл. №.19.

25. Евглевский Д.А., Евглевский А.А., Тимкова Е.А., Худяков С.И., Татарников

К.В. Способ повышения эффективности антибиотиков к резистентным E. coli

//Патент РФ № 2476210. Заявка №2011141638/10. Приоритет 13.10.2011. Ре-

гистрация в Госреестре изобретений 27.02.2013. Бюл. №.6.

26.Евглевский Д.А. Способ повышения биоцидного лечебного действия крем-

эмульсии линкоспектина//Патент № 2505285. Заявка № 2012121738/15. При-

оритет 25.05.2012. Регистрация в Госреестре изобретений 27.01.2014.

Бюл.№3.

27.Евглевский Д.А. Способ повышения биоцидного и лечебного действия

крема – суспензии с метронидазолом //Патент № 2527330. Заявка №

2012128603/15.Приоритет 05.07.2012. Регистрация в Госреестре изобретений

27. 08.2014. Бюл. №.24.

28.Евглевский, Д.А. Способ получения левомициновой мази с глутаровым

альдегидом и этонием//Патент № 2495659. Заявка № 2011131125/15. Приори-

тет 25.07.2011. Регистрация в Госреестре изобретений 20.10.2013. Бюл. №29.

Монографии

1. Евглевский, Д.А. Современные основы вирусологии и иммунопрофилакти-

ки/ А.А. Евглевский, С.Ю. Стебловская, Д.А. Евглевский// Монография ре-

комендована УМО в области зоотехнии и ветеринарии от 14.02.2007 №06-

193. – Курск. – 2010. – 148с.

2. Евглевский, Д.А. Инфекционные болезни свиней (диагностика, иммунопро-

филактика, терапия)/ А.А. Евглевский, Д.А. Евглевский// Монография ре-

комендована решением ДП ветеринарии от 04.06.2010 и УМО в области зоо-

технии и ветеринарии от 03.07.2010 №63-93. – Курск. – КГСХА. – 2011. –

146с.

3. Евглевский, Д.А. Общая эпизоотология и иммунопрофилактика (классифи-

кационные критерии)/ А.М. Коваленко, Д.А. Евглевский// Монография ре-

комендована УМО в области зоотехнии и ветеринарии от 16.12.2010 №60-31.

– Белгород-Курск. – 2011. 144с.

4. Евглевский, Д.А. Иммунопрофилактика и терапия болезней свиней/ А.М.

Коваленко, Д.А. Евглевский// Монография рекомендована ДП ветеринарии

47

от 04.06.2010 и УМО в области зоотехнии и ветеринарии от 03.07.2010 №63-

94. – Белгород-Курск. – 2011. – 148с.

5. Евглевский Д.А. Основы общей и частной ветеринарной эпидемиологии с

иммунопрофилактикой/ А.А. Евглевский, А.М.Коваленко и Д.А.Евглевский

// Монография рекомендована ДП ветеринарии МСХ Ф от 04.0.2010 г и УМО

(Гриф УМО от 16.12.2010 № 60-31: Курск – 2012 г. )– 358 с. Отпечатано «Де-

ловая полиграфия».

6. Евглевский Д.А. Основы общей и частной ветеринарной вирусологии и

иммунопрофилактики/ А.А.Евглевский, С.Ю. Стебловская, Д.А. Евглев-

ский// Монография рекомендована УМО (Гриф УМО от 23 октября 2012 г.)

№61-33. Курск, «Деловая полиграфия» 174 с.

Дипломы Российской агропромышленной выставки-«Золотая осень»

1. 9-я Российская агропромышленная выставка-12-16 октября 2009г. «Ди-

плом награждения золотой медалью»-Разработка биопрепаратов для с/х жи-

вотных–Курская ГСХА и Курский НИИ АПП за подписью министра МCХ

РФ- Гордеева А.В. и мэра Москвы- Лужкова Ю.М.

2. Диплом награждения серебряной медалью «За разработку комплекса по

диагностики и профилактики инфекционных болезней с/х животных»- за

подписью министра с/х РФ- Гордеева А.В. 1-11 октября 2010г. Курская

ГСХА и Курский НИИ АПП.

3. Диплом за «Разработку биотехнологий повышения эффективности анти-

биотиков»-6-16 октября 2011г. - Курская ГСХА и Курский НИИ АПП. За

подписью министра с/х РФ-Скрынник Е. и мэра Москвы- Собянина С.

4. Диплом 1 степени, награждение золотой медалью 14-й Агропромышлен-

ной выставки «Золотая осень» «Биотехнологичесое обоснование потенциро-

вания иммуногенной и протективной эффективности анатоксин-вакцин и

биоцидного и лечебного действия антибиотиков»-«Золотая осень» Россий-

ской агропромышленной выставки-2012г.

Список научных публикаций в других изданиях

1.

Евглевский, Д.А. Актуальные аспекты этиологии, патогенеза, класси-

фикации и терапии пневмонии у животных/ Д.А. Евглевский, И.Г. Швакова,

А.В. Поздеев// Материалы 15-ой международной научно-практической кон-

ференции, посвященной 300-летию С-Петербурга. – 2003. - С.65-66.

2.

Евглевский, Д.А. Новые подходы в лечении и профилактике послеро-

довых эндометритов и маститов коров в сухостойный период/ В.В. Галкин,

Н.В. Воробьева, Д.А. Евглевский// Материалы 15-ой международной науч-

но-практической конференции «Новые фармакологические средства в вете-

ринарии», посвященной 300-летию С-Петербурга. - 2003. - С.12-13.

48

3.

Евглевский, Д.А. Научно-практические подходы получения иммуноак-

тивных препаратов при стафило-стрептококкозе плотоядных/ Д.А. Евглев-

ский, И.Г. Швакова, А.В. Поздеев// Ветеринарная медицина. Международ-

ный межведомственный тематический сборник. – Харьков. – 2003. – С.225-

227.

4.

Евглевский, Д.А. Влияние состояния иммунной системы животных на

формирование полирезистентных штаммов микроорганизмов/ Д.А. Евглев-

ский, П.В. Калуцкий, А.В. Поздеев// Сборник научных трудов Курских вузов

«Актуальные проблемы образования и медицины», издательский центр

«ЮМЭКС». - Курск – 2003. – С.25-26.

5.

Евглевский, Д.А. Современные подходы к отбору иммуннопротектив-

ных штаммов

стафилококков при изготовлении анатоксин-вакцины/ Д.А.

Евглевский, Е.А. Тимкова, И.Г. Швакова// Сборник научных трудов Кур-

ских вузов «Актуальные проблемы образования и медицины», издательский

центр «ЮМЭКС». - Курск – 2003. – С.23-25.

6.

Евглевский, Д.А. Результаты изучения факторов внешней среды на

биологические свойства микроорганизмов/ А.Ю. Айдиев, Д.А. Евглевский

// Сб. научн. тр. КГСХА «Современные проблемы ветеринарной медицины

и животноводства», издательство Курской ГСХА. – 2006. – С.6-8.

7.

Евглевский, Д.А. Оптимизация, детоксикация и инактивация токсино-

аллергенов/ Д.А. Евглевский, С.Н. Норец, О.Д. Печенин, Е.А. Тимкова// Сб.

научн. тр. КГСХА «Передовые технологии науки и образования», издатель-

ство Курской ГСХА. – 2004. – С.10-12.

11. Евглевский, Д.А. Получение и применение стафилококковых анатоксин-

вакцин/ А.А. Евглевский, Д.А. Евглевский, В.В. Иванов// Материалы Все-

российской научно-практической конференции, посвященной 120-летию ве-

теринарной службы Курской области. – Курск. – 2005. – С.130-132.

12. Евглевский, Д.А. Научно-практические аспекты лечения и профилактики

стафило-стрептококкозов у плотоядных/ А.А. Евглевский, Д.А. Евглевский,

В.В. Иванов// Материалы Всероссийской научно-практической конференции,

посвященной 120-летию ветеринарной службы

2005. – С.122-123.

Курской области. – Курск. –

13. Евглевский, Д.А.

Иммунопротективная активность анатоксинов/ Д.А.

Евглевский, В.М. Коломиец, Е.А. Тимкова// Сборник научных трудов Кур-

ских вузов «Актуальные проблемы образования и медицины», издательский

центр «ЮМЭКС». - Курск – 2003. – С.26-27.

14. Евглевский, Д.А. Жидкая синтетическая питательная среда для выделения

и выращивания эшерихий/ Д.А. Евглевский, М.А. Смирнов// Материалы

международной

научно-практической

конференции

профессорско-

преподавательского состава и аспирантов КГСХА имени проф. И.И. Иванова

49

«Актуальные проблемы повышения эффективности

агропромышленного

комплекса». Курск. – 23-25 января 2008, ч.3. – С.124-126.

15. Евглевский, Д.А. Плотная синтетическая питательная среда для выделения

и выращивания эшерихий/ Д.А. Евглевский, М.А. Смирнов// Материалы

международной

научно-практической

конференции

профессорско-

преподавательского состава и аспирантов КГСХА имени проф. И.И. Иванова

«Актуальные проблемы повышения эффективности агропромышленного

комплекса». Курск. – 23-25 января 2008, ч.3. – С.126-128.

16. Евглевский, Д.А. Пробиотики в комплексной терапии колибактериоза у

поросят/ А.А. Евглевский, Д.А. Евглевский, М.А. Смирнов// Материалы меж-

дународной научно-практической конференции, посвященной 125- летию вете-

ринарии Курской области «Актуальные проблемы ветеринарной медицины».

Курск. 22-23 мая 2008. – С.104-107.

17. Евглевский, Д.А. Пробиотики в комплексной терапии сальмонеллеза у

поросят/ А.А. Евглевский, Д.А. Евглевский, М.А. Смирнов, И.А. Разинькова,

С.Ю. Стебловская// Материалы международной научно-практической конфе-

ренции, посвященной 125-летию ветеринарии Курской области «Актуальные

проблемы ветеринарной медицины». Курск. 22-23 мая 2008. – С.434-437.

18. Евглевский, Д.А. Влияние лазерного облучения и магнитных полей на

биологические свойства Escherichia Coli и Salmonella Tiphimurium/ Д.А. Евг-

левский, М.А. Смирнов, И.А. Разинькова, Е.А. Стрекалова//Материалы меж-

дународной

научно-практической

конференции

профессорско-

преподавательского состава и аспирантов КГСХА имени проф. И.И. Иванова

«Теоретические и прикладные проблемы ветеринарной медицины». Курск.

- 2009. – С.61-66.

19. Евглевский, Д.А. Синтетическая среда для выделения и выращивания

эшерихий/ Д.А. Евглевский, М.А. Смирнов, Е.А. Стрекалова //Материалы

международной

научно-практической

конференции

профессорско-

преподавательского состава и аспирантов КГСХА имени проф. И.И. Иванова

«Теоретические и прикладные проблемы ветеринарной медицины». Курск. -

2009. – С.67-69.

20. Евглевский, Д.А. Разработка элективной синтетической питательной среды

для совершенствования колибактериозных анатоксин-вакцин/ Д.А. Евглев-

ский, М.А. Смирнов, В.А. Кузьмин// Материалы международной научной

конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников

и аспирантов Санкт-Петербургской академии ветеринарной медицины. Санкт-

Петербург. - 2010. – С.27-29.

21. Евглевский, Д.А. Состояние и перспективы создания туберкулезных био-

препаратов/ А.А. Евглевский, А.М. Коваленко, Д.А. Евглевский, И.И.

Смирнов// Материалы международной научно-практической конференции

50

проф. И.И. Иванова «Теоретические

медицины». Курск. - 2009. – С.49-50.

и прикладные проблемы ветеринарной

23. Евглевский, Д.А. Повышение эффективности специфической профилактики

и лечения дерматитов у собак/ Д.А. Евглевский, С.Н. Кретова, Е.А. Стрека-

лова// Материалы международной научно-практической конференции про-

фессорско-преподавательского состава и аспирантов КГСХА имени проф.

И.И. Иванова «Теоретические и прикладные проблемы ветеринарной меди-

цины». Курск. - 2009. – С.50-54.

24. Евглевский, Д.А. Элективная среда и щадящие средства подавления посто-

ронней микрофлоры при выделении сальмонелл из патологического мате-

риала/ Д.А. Евглевский, И.А. Разинькова, Е.А. Стрекалова// Материалы ме-

ждународной

научно-практической

конференции

профессорско-

преподавательского состава и аспирантов КГСХА имени проф. И.И. Иванова

«Теоретические и прикладные проблемы ветеринарной медицины». Курск. -

2009. – С.54-57.

25. Евглевский, Д.А. Протективная активность туберкулезного анатоксина/

профессорско-преподавательского состава и аспирантов КГСХА имени проф.

И.И. Иванова «Теоретические и прикладные проблемы ветеринарной меди-

цины». Курск. - 2009. – С.47-49.

22. Евглевский, Д.А. Десенсебилизирующие свойства и аллергизирующая

активность туберкулезного анатоксина/ Д.А. Евглевский, А.М. Коваленко,

И.И. Смирнов// Материалы международной научно-практической конферен-

ции профессорско-преподавательского состава и аспирантов КГСХА имени

Д.А. Евглевский, И.И.

Смирнов// Материалы международной научно-

практической конференции профессорско-преподавательского состава и ас-

пирантов КГСХА имени проф. И.И. Иванова «Теоретические и прикладные

проблемы ветеринарной медицины». Курск. - 2009. – С.57-59.

26. Евглевский, Д.А. Иммуногенные свойства туберкулезного анатоксина/ Д.А.

Евглевский,

И.И.

Смирнов//

Материалы

международной

научно-

практической конференции профессорско-преподавательского состава и ас-

пирантов КГСХА имени проф. И.И. Иванова «Теоретические и прикладные

проблемы ветеринарной медицины». Курск. - 2009. – С.59-61.

27. Евглевский, Д.А. Изучение иммуногенной активности туберкулезного

анатоксина/ Д.А. Евглевский, И.И. Смирнов, В.А. Кузьмин// Сб. научн. тр.

С-Петербургской ГАВМ «Актуальные проблемы ветеринарной медицины». –

2010. – С.19-21.

28. Евглевский, Д.А. Способ подавления посторонней микрофлоры при выде-

лении сальмонелл/ Д.А. Евглевский, И.А. Разинькова// Материалы между-

народной

научно-практической

конференции

профессорско-

преподавательского состава и аспирантов КГСХА имени проф. И.И. Иванова

51

«Актуальные проблемы повышения эффективности агропромышленного

комплекса». Курск. – 23-25 января 2008, ч.3. – С.167-169.

29. Евглевский, Д.А. Синтетические питательные среды для выделения и вы-

ращивания сальмонелл/ Д.А. Евглевский, И.А. Разинькова// Материалы ме-

ждународной

научно-практической

конференции

профессорско-

преподавательского состава и аспирантов КГСХА имени проф. И.И. Иванова

«Актуальные проблемы повышения эффективности агропромышленного

комплекса». Курск. – 23-25 января 2008, ч.3. – С.171-173.

30. Евглевский, Д.А. Повышение эффективности специфической профилактики

лейкоза крупного рогатого скота/ Д.А. Евглевский, А.А. Евглевский// Мате-

риалы международной научно-практической конференции профессорско-

преподавательского состава и аспирантов КГСХА имени проф. И.И. Иванова

«Наука и инновации в сельском хозяйстве». Курск. – 2011, ч.3. – С.183-185.

31. Евглевский, Д.А. Универсальная синтетическая среда для выращивания

микобактерий туберкулеза, стафилококков, сальмонелл, кишечной палочки и

пробиотиков/ Д.А. Евглевский, С.Н. Кретова, И.И. Смирнов// Материалы

международной

научно-практической

конференции

профессорско-

преподавательского состава и аспирантов КГСХА имени проф. И.И. Иванова

«Наука и инновации в сельском хозяйстве». Курск. – 2011, ч.3. – С.200-202.

32. Евглевский, Д.А. Научно-практические подходы повышения эффективно-

сти и снижения токсичности антибиотиков/ Д.А. Евглевский, А.А. Евглев-

ский// Материалы международной научно-практической конференции про-

фессорско-преподавательского состава и аспирантов КГСХА имени проф.

И.И. Иванова «Наука и инновации в сельском хозяйстве». Курск. – 2011, ч.3.

– С.193 -195.

33. Евглевский, Д.А. Иммунологические сдвиги при сальмонеллезе/ А.М.

Коваленко, Д.А. Евглевский, А.А. Евглевский// Материалы международной

научно-практической конференции профессорско-преподавательского соста-

ва и аспирантов КГСХА имени проф. И.И. Иванова «Наука и инновации в

сельском хозяйстве». Курск. – 2011, ч.3. – С.207 - 211.

34. Евглевский, Д.А. Индикация микобактерий секренированием/ А.М. Кова-

ленко, Д.А. Евглевский// Сб. научн. тр. Курской ГСХА, Курск. – 2008. – С.6-

8.

35. Евглевский, Д.А. Бактерицидные, вирусоцидные и фунгицидные свойства

антибиотиков с помощью глутарового альдегида и этония/ Д.А. Евглевский

//Материалы международной научно-практической конференции-«Научное

обеспечения агропромышленного производства», Курск,часть 3-2012.-С.170-

171.

36. Евглевский, Д.А. Повышение протективной и имуногенной активности

колисальмонеллёзной анатоксин-вакцины. / Д.А. Евглевский, Петрова Ж.Е.,

52

Татарников К.В. //Материалы международной научно-практической конфе-

ренции «Научное обеспечения агропромышленного производства», Курск

,часть 3-2012.-С.178-179.

37. Евглевский, Д.А. Редуцирование таксичности и потенцирование эффектив-

ности антибиотиков./ Д.А Евглевский //Материалы международной научно-

практической конференции «Научное обеспечения агропромышленного про-

изводства», Курск, часть 3-2012.-С.183-185.

38. Евглевский, Д.А. Ассоциированная анатоксин-вакцина для профилактики

лечения гнойно-септических болезней./ Д.А. Евглевский //Материалы меж-

дународной научно-практической конференции «Научное обеспечения агро-

промышленного производства», Курск, часть 3-2012.-С.189-190.

39. Евглевский, Д.А. Потенцирование эффективности и редуциррование ток-

сичностей антибиотиков глутаровым альдегидом и этонием/ Д.А. Евглев-

ский//Материалы международной научно-практической конференции «На-

учное обеспечения агропромышленного производства»,Курск,часть 3-2012.-

С.192-193.

40. Евглевский, Д.А. Получение и применение стафилококкового аллергена./

Д.А. Евглевский , Б.М. Тагирмирзоев //Материалы международной научно-

практической конференции «Научное обеспечения агропромышленного про-

изводства».-Курск.-2012. часть 3-С.201-202.

41. Евглевский, Д.А. Эффективность стафилококковой анатоксин-вакцины и

модифицированных полимеризацией антибиотиков при лечении коров, боль-

ных маститом./ Д.А. Евглевский, Б.М. Тагирмирзоев // //Материалы между-

народной научно-практической конференции «Научное обеспечение агро-

промышленного производства», Курск, -2012. -часть 3-С.231-232.

42. Евглевский, Д.А. Способ получения и применения колибактериозной ана-

токсин-вакцины с повышенным иммуногенными и протективными свойства-

ми./ Д.А. Евглевский//Агропромышленный комплекс – контуры будущего. –

Материалы международной научно-практической конференции студентов,

аспирантов, молодых ученых. -Курск, 12-14 ноября 2014. - ч.3.- с. 202-205.

43. Евглевский, Д.А. Повышение протективных и биоцидных свойств колибак-

териозной анатоксин-вакцины коллоидными ионами серебра при оральной

вакцинации поросят./ Д.А. Евглевский//Агропромышленный комплекс –

контуры будущего. – Материалы международной научно-практической кон-

ференции студентов, аспирантов, молодых ученых. Курск, 12-14 ноября 2014

г. ч.3. с. 205-206.

44. Евглевский, Д.А. Влияние коллоидных ионов серебра на биоцидную и

лечебную

эффективность

линкоспектина/

Д.А.

Евглев-

ский//Агропромышленный комплекс – контуры будущего. – Материалы ме-

53

ждународной научно-практической конференции студентов, аспирантов, мо-

лодых ученых. Курск.- 2014. -ч.1. -. с. 141-143.

54



Похожие работы:

«Нa прaвaх рукопиcи КОРЗУНИН Андрей Влaдимирович ПCИХОФИЗИОЛОГИЧЕCКИЕ КРИТЕРИИ ОЦЕНКИ НЕРВНО-ПCИХИЧЕCКОЙ УCТОЙЧИВОCТИ В ПРОЦЕCCЕ ВОЕННО-ПРОФЕCCИОНАЛЬНОЙ АДАПТАЦИИ ВОЕННОCЛУЖАЩИХ 19.00.02 – пcихофизиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации нa cоиcкaние ученой cтепени кaндидaтa медицинcких нaук Санкт-Петербург 2015 2 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном военном образовательном учреждении высшего профессионального образования Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова Министерства...»

«Янкин Сергей Сергеевич ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ПОВЕРХНОСТНЫХ АКУСТИЧЕСКИХ ВОЛН С НЕОДНОРОДНОСТЯМИ, СРАВНИМЫМИ С ДЛИНОЙ ВОЛНЫ 01.04.03 Радиофизика Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Саратов 2015 Работа выполнена на кафедре физики твердого тела факультета нанои биомедицинских технологий ФГБОУ ВПО Саратовский государственный университет им. Н. Г. Чернышевского. Научный руководитель Сучков Сергей Германович доктор...»





 
© 2015 www.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.